论文部分内容阅读
目的探讨LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响。方法利用RT-PCR检测人透明细胞肾癌细胞系786-O和人胚肾细胞系HEK-293中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因-1(Largetumor suppressor gene1, LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)mRNA表达水平,用亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequence-PCR, BSP)对LATS1低表达细胞786-O进行甲基化分析,5-氮杂-2脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine, DAC)处理786-O和HEK-293后,用RT-PCR和Western Blot检测各组细胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测各组细胞凋亡和周期,细胞增殖/毒性试剂(Cell counting kit-8, CCK-8)检测各组细胞增殖抑制情况。结果786-O较HEK-293LATS1mRNA表达水平显著降低(P<0.05),YAP mRNA表达水平显著升高(P<0.05),BSP显示LATS1在人肾癌细胞系786-O中高度甲基化;DAC处理786-O后,LATS1mRNA和蛋1基金项目:国家自然科学基金面上项目(30972999)白表达水平显著升高(P<0.05),YAP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),周期停滞在G1期(P<0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)、细胞凋亡显著增加(P<0.05),而HEK-293组均无明显变化(P>0.05)。结论LATS1基因去甲基化后下调YAP基因表达,抑制786-O细胞增殖并诱导其凋亡。LATS1基因甲基化可能在肾癌发生中起重要作用。