大鼠结肠肌间神经丛内去甲肾上腺素能神经元的化学神经解剖学研究

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目的:验证大鼠结肠肌间神经丛内存在多巴胺-β-羟化酶(DBH)阳性的去甲肾上腺素(NE)能神经元,观察其在丛内的分布并阐明形态学特征;研究大鼠结肠肌间神经丛内NE能神经元的化学神经解剖学特点及其与丛内不同类型神经元之间的关系和联系,为进一步阐明肌间神经元分类的神经解剖学基本问题和揭示其功能等提供理论依据。方法:(1)借助逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting、荧光原位杂交组织化学以及免疫荧光组织化学染色技术,分别检测DBH m RNA和蛋白在结肠肌间神经丛的表达与分布;(2)使用DBH抗体与肠内不同类型的神经元标记物进行免疫荧光组织化学双重染色,观察NE能神经元的化学神经解剖学特征及其与丛内不同类型神经元胞体和突起之间的关系。结果:(1)RT-PCR和Western blotting检测到大鼠结肠肌间神经丛存在DBH m RNA及DBH蛋白的表达,荧光原位杂交组织化学染色技术观察到部分神经元表达DBH探针阳性信号,荧光原位杂交与免疫荧光组织化学双重染色技术观察到表达DBH m RNA阳性信号的细胞亦呈DBH阳性,免疫荧光组织化学双重染色观察到DBH阳性胞体表达PGP9.5(神经元标志物),不表达GFAP(星形胶质细胞标志物)。(2)免疫荧光组织化学双重染色观察到DBH与血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SOM)的双标阳性神经元,偶见DBH与5-羟色胺(5-HT)的双标阳性神经元。其中DBH/VIP双标神经元的数量占VIP阳性神经元的比例约为(30±0.76)%,占DBH阳性神经元的比例约为(65±0.45)%。而DBH/SOM双标神经元的数量占SOM阳性神经元的比例约为(28±0.68)%,占DBH阳性神经元的比例约为(81±0.34)%。未观察到DBH与乙酰胆碱转移酶(Ch AT)、P物质(SP)、降钙素相关基因肽(CGRP)、一氧化氮合酶(NOS)双标的阳性神经元。此外,可见部分DBH阳性纤维和终末紧密缠绕在Ch AT、SP、NOS、VIP、SOM阳性神经元的周围;部分SP、CGRP阳性纤维和终末亦分布在DBH阳性神经元的周围。结论:(1)通过分子生物学和形态学等实验手段确认大鼠结肠肌间神经丛内存在DBH阳性的NE能神经元。此外,它还为基于交感神经和副交感神经系统的神经化学性质而非位置的神经元新分类提供了新的理论线索。(2)大鼠结肠肌间丛DBH阳性NE能神经元可能大部分为中间神经元,通过作用于运动神经元或其他中间神经元发挥运动调控的作用。同时这些DBH阳性NE能神经元可能接受其他神经元的调控从而参与构成复杂的ENS调控网络。
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