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目的:建立卵巢癌上皮细胞系A2780的顺铂耐药株A2780-CP;比较A2780-CP与A2780生物学特性间的差异;分析A2780-CP中CD44~+细胞的肿瘤干细胞生物学特性。寻找卵巢癌细胞耐药性与肿瘤干细胞生物学特性间是否存在一定的联系。方法:1、通过小剂量不间断顺铂刺激获得卵巢癌细胞耐药株A2780-CP;2、通过MTT研究A2780-CP与A2780在药物敏感性中的差异;3、通过流式分析研究A2780-CP与A2780在细胞周期中的差异;在抗凋亡能力中的差异;4、通过流式技术分析常见的两种肿瘤干细胞标志:CD44、CD24在耐药株和普通细胞株间的差异;5、流式分选A2780-CP细胞中的CD44~+细胞;6、CD44~+A2780-CP细胞功能研究:1)Transwell小室迁移实验比较CD44~+细胞和CD44~-细胞在迁移能力上的差异;2)Transwell小室侵袭实验比较CD44~+细胞和CD44~-细胞在侵袭能力上的差异;3)无血清条件下CD44~+A2780-CP细胞成球能力;4)CD44~+ A2780-CP细胞和CD44~-A2780-CP细胞裸鼠皮下异种移植实验;7、免疫组化分析CD44肿瘤干细胞标志在卵巢癌组织样本和正常卵巢组织样本中的表达及其差异。结果:1、A2780-CP与A2780细胞表型间的差异变大;细胞周期中G2期细胞比例减少;2、A2780-CP的IC50值为114.7μm,比未经过压力筛选的A2780细胞株的耐药性高出接近3倍;3、A2780-CP的抗凋亡能力与A2780相比并没有明显优势;4、A2780-CP细胞表面肿瘤干细胞标志CD44表达率远远高于A2780;CD44~+A2780细胞的体外迁移、增殖、侵袭能力高于CD44~-A2780-CP细胞;1万个CD44~+A2780-CP细胞就可以让裸鼠在2周左右时间体外成瘤;5、免疫组化结果显示CD44肿瘤干细胞标志在恶性度分级较高的卵巢癌组织中高表达,在癌旁正常卵巢组织中没有发现表达。结论:1、不断提高化疗药物顺铂剂量的方法可以获得卵巢癌耐药细胞株A2780-CP;2、通过对比A2780-CP细胞株和A2780在CD44和CD24肿瘤干细胞表面标志的差异,发现CD44确实是一个和肿瘤耐药相关的肿瘤干细胞标志;3、CD44~+A2780-CP细胞其迁移、增值及侵袭的能力符合肿瘤干细胞特性,并通过裸鼠体内成瘤实验得以验证。临床卵巢癌组织样本和癌旁或对侧正常组织样本对照说明CD44肿瘤标记物与卵巢癌及其病理分级间存在联系。