二苯乙烯苷对血小板功能的影响及其机制研究

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本文主要从以下几方面展开论述:  第一部分 THSG对血小板功能的影响  背景和目的:  何首乌作为中华民族传统的中草药,生首乌具有解毒(截疟)、润肠通便、消痈的作用;制首乌具有补益精血、乌须发、强筋骨、补肝肾的功效。《开宝本草》记载何首乌“入血分,止心痛,益血气”。THSG是从中国传统中药何首乌的根茎中提取的一种水溶性成分,具有抗氧化和抗炎等功效。我们通过不同的实验方法研究THSG对血小板聚集、颗粒释放和扩展等功能的影响,旨在探索THSG的对血小板功能的影响。本研究为THSG对血小板作用的药物研发提供实验依据。  方法:  1.使用血小板聚集检测仪观察THSG对collagen(2μg/mL),凝血酶(0.04U/mL),U46619(3μM)及ADP(2μM)诱导的血小板聚集的影响。  2.使用血小板聚集检测仪观察THSG对collagen(2μg/mL)诱导的血小板ATP释放的影响。  3.使用流式细胞仪观察THSG对血小板P-selectin表达和PAC-1 binding的影响。  4.使用荧光显微镜观察THSG对人血小板在固化纤维蛋白原上的扩展的影响。  结果:  1. THSG对由collagen诱导的血小板聚集有较强的抑制作用,但对由ADP、U46619和凝血酶诱导剂诱导的血小板聚集没有影响。  2.THSG对由collagen诱导的血小板ATP颗粒释放有较强的抑制作用。  3.THSG对血小板P-选择素表达率和PAC-1binding有较强的抑制作用。  4.THSG对血小板在固化的纤维蛋白原上的扩展有很强的抑制作用。  结论:THSG具有较强的抗血小板活性。  第二部分 THSG对血小板功能影响的机制研究  目的:  研究THSG对血小板功能影响的机制  方法:  用纤维蛋白原诱导血小板扩展,采用Western blot技术检测FcγRIIa,Akt(Ser473),GSK3β(Ser9),Src(Tyr416)和p38 MAPK磷酸化表达,检测给予THSG干预后相关蛋白分子磷酸化表达的变化。  结果:  THSG(50umol/L)能较明显的抑制FcγRIIa,Akt(Ser473)和GSK3β(Ser9)磷酸化,但对Src(Tyr416)和p38MAPK的磷酸化没有影响。  结论:  THSG可能通过抑制FcγRIIa/Akt/GSK3β的磷酸化而发挥抑制血小板的功能作用。
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