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目的探讨干扰胱天蛋白酶寡集域蛋白 9(caspase recruitment domain containing protein 9,CARD9)基因对急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠炎症损伤的作用及其机制研究方法将60只健康雄性SD大鼠随机分成对照组、对照+siRNA组、对照+CARD9 siRNA组、SAP 组、SAP+siRNA 组、SAP+CARD9 siRNA 组,其中 SAP 组和 SAP+CARD9 siRNA组中:n=18,每组分成3h、6h、12h三个时间点,每个时间点n=6:其余四组中(对照组、对照+siRNA组、对照+CARD9 siRNA组、SAP+siRNA组)n=6,时间点为6h。SAP组:采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠(lml/kg)的方法制作SAP大鼠模型。对照组(假手术组):打开腹腔用钝器轻划胰腺3次后直接关腹。SAP+CARD9 siRNA组:在SAP大鼠造模前,采用siRNA-CARD9小分子,给大鼠尾静脉注射,同时应用siRNA-control作为对照组。各时间点收集各组大鼠静脉血和腹水,检测各组血清淀粉酶水平和腹水量;收集胰腺组织,观察其病理以及髓过氧化物酶的改变。胰腺组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CARD9、Dectin-1、TLR-4、p38MAPK、NF-κB p65 基因的表达变化用 Real-time PCR 检测。采用 Western Blot 法检测胰腺组织 CARD9、Dectin-1、TLR-4、p38MAPK、NF-κB p65的蛋白表达水平。ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平。结果1.急性重症胰腺炎胰腺组织中CARD9 mRNA以及蛋白表达水平较对照组在3h即明显升高,到12h达到顶峰。siRNA干扰病毒应用后,对照+siRNA组和SAP+siRNA组未见CARD9表达下降,SAP+CARD9 siRNA组的CARD9蛋白和基因表达水平明显受抑,且在SAP造模前48h注射CARD9 siRNA沉默效果最好。说明运用siRNA干扰病毒沉默CARD9基因达到了抑制CARD9表达的作用,SAP+CARD9 siRNA组模型成功建立,为后续进一步实验做好准备。2.沉默CARD9基因后对SAP的影响:对照组仅出现少量腹水,SAP组在3h即出现大量腹水,到6h和12h腹水量仍持续增加;而SAP+CARD9 siRNA组在3h腹水量即明显减少,到6h和12h基本维持低水平,与SAP组相比有统计学意义(P<0.05)。SAP组血清淀粉酶较对照组明显升高(P<0.05),而SAP+CARD9 siRNA组的血清淀粉酶水平与SAP组相比无明显变化。SAP组胰腺组织MPO较对照组在3h即明显升高,到12h达到顶峰,而SAP+CARD9 siRNA组出现明显降低(P<0.05)。对照组胰腺组织病理无明显的变化,而SAP组则出现明显的胰腺组织间质水肿、出血、大量炎性渗出甚至组织坏死等表现;SAP+CARD9 siRNA组在6h和12h胰腺组织炎性表现有明显的改善。SAP组血清TNF-α、IL-1β、IL-6在3h水平明显升高,而SAP+CARD9 siRNA组炎性因子水平显著降低;胰腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平变化与血清TNF-α、IL-1β、IL-6变化一致。胰腺组织中的模式识别受体TLR-4、Dectin-1水平变化和胰腺组织炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6变化相似,在SAP组显著升高,在SAP+CARD9 siRNA组显著降低。SAP组胰腺组织NF-κBp65和p38MAPK表达水平与CARD9蛋白相一致,在12h表达水平明显上升,而在SAP+CARD9 siRNA组3h、6h、12h胰腺组织NF-κBp65和p38MAPK基因以及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论在大鼠SAP模型中,胰腺组织CARD9蛋白的表达是明显上升的,通过腺病毒干扰沉默CARD9基因抑制其表达后,能够抑制胰腺组织NF-κBp65和p38MAPK的活化,减少TNF-α、IL-1β等炎症因子的释放从而有效减轻胰腺炎症反应、改善SAP病情。推测CARD9是通过激活NF-κBp65和p38MAPK信号通路发挥作用的,有望作为治疗SAP的一个新的、有效靶点。