【摘 要】
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[目 的]血管内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）和骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是骨组织工程中常见的种子细胞,本研究通过细胞增殖实验探究EPCs和BMSCs共培养体系中最适细胞比例。[方法]（1）在麻醉下通过颈椎脱臼法处死SD大鼠,解剖后取双侧股骨及胫骨通过贴壁法分别分离培养骨髓来源
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[目 的]血管内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）和骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是骨组织工程中常见的种子细胞,本研究通过细胞增殖实验探究EPCs和BMSCs共培养体系中最适细胞比例。[方法]（1）在麻醉下通过颈椎脱臼法处死SD大鼠,解剖后取双侧股骨及胫骨通过贴壁法分别分离培养骨髓来源EPCs与BMSCs,并通过小管形成实验及免疫双标染色鉴定EPCs,通过诱导BMSCs成骨、成脂及成软骨分化并利用不同的分化染色试剂盒鉴定BMSCs;（2）通过将分离培养的EPCs和BMSCs联合培养,按EPC/BMSC为单纯EPCs、2:1、1:1、1:2以及单纯BMSCs进行联合培养,通过观察细胞形态及细胞增殖实验确定联合培养的细胞比例。（3）利用Transwell小室构建EPC-BMSC细胞共培养模型,并对EPC-BMSC在2:1（实验组）和1:1（对照组）细胞共培养24小时后进行小管形成实验（4小时）,通过ImageJ软件分析小管管长及分支节点数来评估检测EPCs小管形成能力;对EPC-BMSC在2:1（实验组）和1:1（对照组）细胞共培养24小时后,通过实时荧光定量PCR检测骨桥蛋白和骨钙素的mRNA表达情况分析BMSCs的成骨相关能力。[结 果]（1）成功通过贴壁法分离培养骨髓来源的EPCs和BMSCs,骨髓来源EPCs免疫双标染色及CD31免疫荧光染色阳性,并具备成管能力;成功诱导BMSCs分化为成骨细胞、脂肪细胞以及成软骨细胞;（2）EPCs与BMSCs在不同比例下联合培养,通过细胞增殖实验发现EPC/BMSC的比例为2:1时共培养细胞增殖活性最高;（3）在EPC-BMSC细胞共培养下,EPCs与BMSCs的细胞比例为2:1时BMSCs的成骨相关基因表达上调,而EPCs的小管形成的长度和节点数量无明显变化。[结 论]在SD大鼠EPC-BMSC细胞共培养体系中,EPCs与BMSCs细胞比例为2:1时共培养细胞的增殖活性较高,BMSCs的成骨能力较强。
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