研究背景：国内外乙脑疫苗临床结果表明，人体对乙脑抗原本身（灭活的乙脑病毒）耐受性良好，乙脑疫苗免疫后人体产生的不良反应轻微。临床研究和临床使用过程中出现的少数严重不良反应或不良事件，已证明与抗原本身无关，而抗原外的其他成分才是免疫人群产生不良反应的主要原因。这些成分包括：病毒培养用动物细胞的残留蛋白质和残留DNA；培养基残留如小牛血清；灭活剂残留（如甲醛）；制剂添加的赋形剂（如明胶）、防腐剂（如硫柳汞）等。因此，对乙脑灭活疫苗而言，尽可能提高抗原纯度，避免在制剂中添加不合适的赋形剂、保护剂和防腐剂，制品的安全性将有可能得到进一步提高。研究目的：国内外现有的乙脑疫苗纯化工艺，普遍采用区带离心技术路线或多步凝胶过滤技术路线。存在的最大问题是有害物质残留量过高，从而导致疫苗产品存在安全性隐患。为此，本课题对乙脑疫苗的纯化工艺进行了系统的研究,以期提高疫苗成品的纯度，减少接种副反应的发生。研究方法：（1）灭活工艺研究：比较甲醛与β-丙内酯两种灭活剂对乙脑病毒的灭活效果；（2）浓缩工艺研究：研究不同孔径超滤膜包和不同浓缩倍数对浓缩效果的影响；（3）研究Sepharose4FF和Sephacryl S-300两种分子筛填料对乙脑病毒的纯化效果；（4）研究离子交换层析对乙脑病毒的纯化效果；（5）用优化得到的工艺路线进行了三批小试样品和三批中试样品的纯化。研究结果：（1）β-丙内酯作为灭活剂灭活乙脑病毒有良好的回收率及更低的生产成本；（2）使用300K孔径的膜包浓缩20倍的浓缩工艺参数可以得到较高的抗原回收率及降低后期纯化的处理体积；（3）Sepharose4FF层析可以得到纯度较高的样品，而SephacrylS-300层析样品的抗原回收率更高，在两种填料单步纯化均未达《药典》相关要求情况下，优先选择更高回收率的Sephacryl S-300作为第一步精纯；（4）经过离子交换层析后，宿主DNA残留小于10pg/剂，Vero细胞蛋白质残留量、牛血清白蛋白残留量均低于2010版药典标准10倍以上；（5）三批小试和三批中试样品得到的纯化后原液均稳定达标。研究结论：在原有工艺中增加离子交换层析进行进一步精纯，使抗原纯度得到大幅度提升，不仅残余DNA可达10pg/剂以下，Vero细胞蛋白质残留量、牛血清白蛋白残留量均低于2010版药典标准10倍以上，也显著低于国内所有同类产品，保持了疫苗良好的免疫原性并提高了疫苗的安全性。由于乙脑病毒疫苗接种对象为少年儿童，高质量的产品必将大大降低接种人群的副反应和概率，成为父母和医护人员所欢迎的产品，能产生较高的社会效益和经济效益。