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目的:大肠癌是人类常见恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率均位于前列，广泛的患者群给家庭及社会带来了沉重负担。迄今为止，大肠癌的病因及发病机制尚未完全明确，目前认为可能的病因是环境因素与遗传因素综合作用的结果，而发病机制可能与癌基因与抑癌基因突变、基因多态性、信号传导通路异常等因素有关。多项研究表明，microRNAs（miRNAs）与大肠癌的发生、进展以及转移有直接关系。前期的研究中，我们利用基因芯片技术对大肠癌组织的miRNAs进行高通量大范围的筛查，发现miR-10b及miR-125a-5p呈低表达，可能与大肠癌的发生发展有关。因此，本研究将miR-10b及miR-125a-5p列为研究指标，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative reverse transcription-PCR, RT-qPCR）方法检测两者在大肠癌组织、癌旁正常组织及大肠癌细胞株中的表达水平，并分析其临床意义。方法:12012年6月～2013年6月期间，河北医科大学第一医院行大肠癌根治术患者37例，其中男性21例，女性16例，年龄31-83岁（中位年龄69岁）。患者术前均未行放、化疗及免疫治疗。患者临床病理资料（性别、年龄、Dukes分期、肿瘤位置、组织学类型、淋巴结状态、浸润深度、分化程度、组织远端转移等）登记建表并取得知情同意。每例标本分别取自大肠原发肿瘤组织、上（下）切缘正常黏膜且术后病理证实无癌组织侵犯。2TrizoL法提取大肠癌组织及癌旁正常组织中总RNA。反转录按照美国GeneCopoeia公司反转录试剂盒说明书操作。RT-qPCR检测大肠癌组织及癌旁正常黏膜组织中miRNA-10b、miR-125a-5p的表达，引物购自美国GeneCopoeia公司，按说明书操作。反应条件：95℃预变性10min，然后按95℃15s，60℃30s，72℃10s，进行40个循环，重复3次取平均值。本研究采用2-△CT法，其中ΔCT为CT靶基因与CTU6的差值。3选取8种大肠癌细胞株Caco-2，DLD1，HCT116，HT29，LOVO，SW480，SW620，SW1116进行细胞培养（细胞株由香港中文大学消化疾病研究所于君教授馈赠）。每1～2d换液传代1次，当细胞生长到106～107时，收集细胞提取RNA。应用RT-qPCR方法检测大肠正常黏膜和8种结肠癌细胞株中的miR-10b和miR-125a-5p表达水平。4统计学处理：采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，数据以中位数（四分位数间距）表示，两组间配对样本采用Wilcoxon检验，两组间独立样本采用Mann-Whitney U检验，均以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1miR-10b和miR-125a-5p在大肠癌组织中的表达及临床意义1.1miR-10b在37例患者癌组织、正常黏膜组织中的表达量分别为0.024（0.009，0.061）、0.090（0.043，0.335），差异有统计学意义（Z=-3.900，P=0.0004）。miR-125a-5p在37例患者癌组织、正常黏膜组织中的表达量分别为0.350（0.103，0.672），1.200（0.632，3.237），差异有统计学意义（Z=-4.428，P=9.519E-6）。1.2miR-10b的表达量，在男女性别分组间比较P=0.195；在<69岁组中与≥69岁组间比较，P=0.772；不同肿瘤部位组间比较（P=0.619）；不同浸润深度组间比较（P=0.695）；不同Dukes分期组间相比较（P=0.797）；不同组织学类型组间比较（P=0.667）；不同分化程度组间比较（P=0.395），均没有统计学意义。miR-125a-5p在低分化组中相对表达量为0.053（0.028，0.423），中高分化组中相对表达量为0.441（0.155，0.779），两者相比较，P=0.037，有统计学意义。miR-125a-5p的表达量，在男女性别分组间比较P=0.534；在<69岁组中与≥69岁组间比较，P=0.867；不同肿瘤部位组间比较（P=0.821）；不同浸润深度组间比较（P=0.421）；有无淋巴结转移组间比较（P=0.891）；不同Dukes分期组间比较（P=0.940）；不同组织学类型组间比较（P=0.590）；有无远处转移组间比较（P=0.832），均没有统计学意义。2miR-10b和miR-125a-5p在大肠癌细胞株中的表达miR-10b在大肠癌细胞株中的表达均低于正常黏膜组织，除HT29外，其余七种细胞均有统计学意义（P<0.05）。miR-125a-5p在大肠癌细胞株中的表达均明显低于正常黏膜组织（均P <0.05）。结论:1miR-10b的表达在大肠癌组织中显著低于癌旁正常组织，提示其在大肠癌发生、发展过程中可能发挥抑癌作用。miR-10b的表达与临床病理特征均无关，尚需对其在大肠癌中所发挥的作用做进一步研究。2miR-125a-5p的表达在大肠癌组织中显著低于癌旁正常组织，并且与大肠癌分化程度相关，提示其在大肠癌发生、发展过程中可能发挥抑癌作用，并对大肠癌的预后产生一定影响。3miR-10b和miR-125a-5p在八种大肠癌细胞株中均呈低表达，与癌组织中的表达相一致，进一步印证了两者对大肠癌的发生有负向调节作用。