志贺氏菌(Shigella castellani)是一类短小的杆菌,属于革兰氏阴性菌。它是人类和灵长类动物的肠道致病菌,是最常见的病原体之一,可以导致细菌性痢疾。人类容易感染志贺氏菌,只需较少的菌量就可以使人类患病,主要在发展中国家流行,在我国的发病率仅次于肺炎和结核,同时对全球医疗卫生系统构成重大威胁。目前,研究者已经针对预防志贺氏菌研发出一种新型多糖结合疫苗,这种疫苗虽然具有预防作用,但是往往还存在着免疫原性较差、免疫过程中需要佐剂的添加才能有效发挥效用等缺点,并且制备过程也较繁琐,存在许多弊端。因此,对新型多糖结合疫苗的进一步改造优化工作已成为急需研究的热点。通过对新型多糖结合疫苗的改造,以期达到使其成为更加经济、高效的疫苗的目的,使其具有更广阔的应用前景。本研究从两方面对新型多糖结合疫苗进行了改造优化,主要研究结果如下:1.为提高其免疫原性,减少佐剂的添加,将在免疫反应过程中具有重要作用的细菌脂蛋白添加到多糖结合疫苗中。脂蛋白在免疫系统中既可以触发宿主的先天性免疫系统,又可以引起适应性免疫应答反应,可以作为疫苗的有效成分之一。将脂化区域导入已经构建好的多糖结合疫苗载体,转入志贺氏菌中,使其发生脂化,并成功诱导其表达,得到脂蛋白,将脂蛋白纯化。选取小鼠作为模式动物,采用皮下注射方式进行三次免疫。用ELISA方法检测抗体效价,发现小鼠可以产生IgG抗体;体外杀菌实验表明抗体可以与菌体结合形成抗原抗体复合物,以激活补体途径达到杀死细菌的效果;最后为检测保护性,对三次免疫后的小鼠进行攻毒实验,具有很高的保护效果。2.旨在简化多糖结合疫苗重组蛋白的提取和纯化过程,利用可以直接引起蛋白分泌表达的载体蛋白YebF,使已经构建好的多糖结合疫苗糖基化系统中的目的蛋白直接分泌在细胞外培养基中。这一过程不仅更加简便快捷有效地降低了生产的时间和成本,同时还避免了蛋白在细胞破碎等过程中受到的破坏。