【摘 要】
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根据来源于DNA抗体可变区的TP氨基酸序列,全序列全成核苷酸序列,对全序列合成的核苷酸序列进行序列测定.测序验证无误后,构建TP与MS2原核融合表达载体,同时构建了TP与凋亡相
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根据来源于DNA抗体可变区的TP氨基酸序列,全序列全成核苷酸序列,对全序列合成的核苷酸序列进行序列测定.测序验证无误后,构建TP与MS2原核融合表达载体,同时构建了TP与凋亡相关基因TFAR19 cDNA融合表达载体.诱导后MS2-TP和MS2-TP-TFAR19融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达.表达的融合蛋白包涵体经过变性、复性、凝血酶消化后,对TP的转导活性进行了体外研究.按一定的浓度梯度把MS2-TP和凝血酶切割的MS2-TP-TFAR19蛋白加到贴壁培养的3T3细胞中,作用一定时间后,通过显微镜观察、MTT法、免疫印记和荧光标记等方法检测TP的作用.研究结果表明,TP可以转导与其融合的MS2进入细胞内,使得贴壁生长的3T3细胞迅速皱缩脱落,用免疫印记法检测到被TP转导进入细胞内的MS2蛋白;同时凝血酶切割的MS2-TP-TFAR19中TP能促进TFAR19蛋白进入细胞内并定位到核膜上,使得细胞核膜上荧光明显增强.该实验证明TP能以时间和剂量依赖方式转导与其融合的大分子蛋白质进入细胞内并定位到一定的细胞器内,为功能蛋白的研究、基因治疗和药物导入提供了新的实验方法和依据.
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