中华被毛孢的高密度培养及在饲料添加剂的应用

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天然冬虫夏草是一种名贵的中药,资源稀缺。为充分开发冬虫夏草的自然资源,本论文对引进的一株冬虫夏草无性型-中华被毛孢(Hirsutella sinensis, EMI-20)开展发酵工艺与利用研究。首先对菌株进行形态与分子鉴定。首先从形态学上初步观察实验菌株EMI-20,并且与刘锡琎、尹小武、何苏琴所描述的形态进行对照,对照东京大学的环境扫描电镜菌丝体观察结果,最终证明与他们所描述的相一致。在分子水平上,实验株的18SrDNA序列与中山大学的相似性高达99%,另外通过ITS的系统发生分析表明:实验菌株EMI-20的序列与NCBI上选取的冬虫夏草和中华被毛孢序列同源性高达90%以上。采用单因素优化、正交优化和液体深层发酵中华被毛孢,以改良的YPD培养基为初始培养基,最终,在深层发酵水平的最佳培养基为:2%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.1%酵母粉、KH2PO40.05%、MgSO4?7H2O0.05%、VB10.01%。利用5L发酵罐,在17℃下培养11d,可获得菌丝体生物量达到19.37g/L。相比较于刘永霞、王灿等人于18℃下的摇瓶培养结果:30d生物量为18.94g/L、16d生物量2.75g/L都有一定的提高,对中华被毛孢工业化发酵生产提供基础。创新性的利用中华被毛孢(Hirsutella sinensis)、古尼拟青霉(Paecilomyces gunnii)、蛹拟青霉(Paecilomyces militaris)作为添加剂养殖南美白对虾(Litopenaeus vannamei)。通过实验发现,中华被毛孢作为饲料添加剂,与对照组相比,对南美白对虾的日增重率提高了30%,日增长率提高了25%,日出肉率提高了3.7%,饲料系数降低了66%、存活率提高了52%,使对虾的血清中的溶菌酶活力、酚氧化酶活力分别提高了62.7%、23.9%,肝胰腺中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶活性分别提高了11.4%、7.8%、35%、22.9%、324.2%,肌肉中的丙二醛活力降低了33%。其中饲料系数、存活率、丙二醛浓度、超氧化物歧化酶活力相对于蛹拟青霉与对照差异显著(P<0.05),过氧化氢酶相对于对照组差异极显著(P<0.01),这为水产养殖业提供了一项新型安全的药物饲料添加剂。
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