量子点标记纳米微球金黄色葡萄球菌快速检测方法

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近年来,金黄色葡萄球菌引起的中毒事件频频发生,传统的金黄色葡萄球菌检测基于微生物培养,虽然相对准确,但是耗时费力,因而急需一种可以灵敏、快速、可靠的检测金黄色葡萄球菌的方法。现代快速检测方法中,化学仪器检测能够快速、直观、灵敏的反映检测结果,实现快速检测,但是,如何将微生物信号转变为可检测的化学信号就成为检测过程中相当重要的一步。量子点具有良好的光谱特性和自身优点,使其可以替代传统荧光染料,作为生物荧光探针,本论文使用量子点标记IsdA兔抗抗体,采用注射器与滤膜组合的方式检测金黄色葡萄球菌,为生物信号的富集提供了一种方法,有助于快速检测。以巯基乙酸为稳定剂,对比一步法和两步法合成CdTe量子点,一步法明显优于两步法,最终使用谷胱甘肽为稳定剂,一步法合成了荧光强度较佳的CdTe量子点,并进行了红外表征,红外吸收图谱显示,GSH-CdTe量子点含有羧基及氨基功能基团,可进行下一步的生物应用。重组表达IsdA蛋白,纯化,免疫兔子和小鼠,制备多克隆抗体,但是抗血清及抗体效价都不佳。0.1mMIPTG诱导对数期的大肠杆菌BL21(DE3)-pET26b-IsdA,成功地表达了 IsdA重组蛋白,且为可溶性表达;纯化IsdA重组蛋白;免疫兔子和小鼠,制备出多克隆抗体;谷胱甘肽免疫量子点紫外全波长扫描图显示,量子点与抗体连接后,量子点的荧光强度增强,表明量子点与抗体连接成功。初步建立了量子点标记IsdA兔抗抗体免疫检测金黄色葡萄球菌的方法,该法对金黄色葡萄球菌有明显的特异性吸附,同时,大肠杆菌有略微的非特异性吸附,检测限约为2.37×105CFU/mL。主要检测了牛奶样品,以102-103CFU/mL的标准将菌液接入样品中,牛奶中,1h时完全不能检出,直至2h时可以检出。
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