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研究背景和目的心源性猝死（Sudden Cardiac Death, SCD）是指由于心脏原因而导致的猝死，可伴或不伴有心脏疾病，是各类猝死案例中最为常见的一种类型。冠心病是一种较为常见的心血管疾病，由于冠状动脉狭窄能引起心肌缺血，缺血后心肌细胞受损坏死，甚至发生心肌梗死，可导致猝死的发生，因而心肌缺血是心源性猝死的原因之一。在对尸体进行法医病理鉴定过程中，心肌组织中存在片状及灶状心肌梗死时，可直接通过肉眼或在显微镜下观察，并对其进行诊断，而短时间心肌缺血导致的心源性猝死，心肌组织通常难以发现典型的病理形态改变，所以早期心肌缺血引起的心源性猝死是法医病理学鉴定中最难以解决的问题之一。有研究表明早期心肌缺血或心肌梗死导致心肌细胞受损，可以诱导成体心肌干细胞（CardiacStem Cells，CSCs）增殖分化，进而修复损伤心肌。CSCs是存在于成体心肌组织中，能够分化增殖为成熟心肌细胞的多能干细胞。高迁移率族蛋白B-1（High Mobility Group Box protein1，HMGB1）在心肌组织因缺血而导致细胞损伤的初期即可从细胞核中释放出来，并参与相关的生物学过程，一直持续到发生心肌梗死，所以研究者认为可以将其作为组织损伤的危险信号。有文献报道，外源性HMGB1能够诱导心肌干细胞的增殖分化，且这个过程可能与miRNA-206的表达有关。因此，本研究检测缺血心肌组织中心肌干细胞或者说是具有心肌干细胞特性心肌细胞的增殖分化，以及HMGB1和miRNA-206的表达变化，为早期心肌缺血梗死提供法医病理学诊断的依据。材料和方法1.选取大连医科大学辽宁省临床病理研究中心法医司法鉴定所2011-2012年的尸检案例标本60例。根据案例所记录的病史、镜下冠状动脉狭窄程度及组织病理学检查结果进行分组：a、早期心肌缺血猝死组25例，该组冠状动脉主要分支的管腔狭窄分级为3到4级，镜下少见典型心肌梗死病理改变，心肌细胞形态不良；b、心肌梗死猝死组15例，此组镜下冠状动脉主要分支的管腔狭窄分级为3到4级，镜下可见典型心肌梗死改变及陈旧瘢痕；c、正常心肌组20例，冠状动脉无狭窄，镜下未见心脏病变，死因为非心源性。对各组案例蜡块连续切片，HE染色。2.采用免疫组织化学的方法，检测各组心肌细胞中c-kit+的表达情况，以及HMGB1的表达。3.提取石蜡包埋心肌组织中的microRNA，利用RT-PCR检测各组miRNA-206的表达情况。4.采用SPSS13.0统计软件对各组心肌干细胞增殖分化情况，以及HMGB1和miRNA-206表达情况进行比较和分析。结果1. HMGB1在不同分组中的表达HMGB1在三组心肌细胞胞核中表达均有阳性表达；早期心肌缺血猝死组和心肌梗死猝死组细胞胞浆中可见有棕黄色，HMGB1呈阳性表达，正常心肌组细胞胞浆呈阴性；早期心肌缺血猝死组阳性率为96%，心肌梗死猝死组的阳性率为100%，正常心肌组阳性率为10%，三组相比存在显著差异（P＜0.05)。2. c-kit+在不同分组中的表达c-kit+免疫组织化学染色阳性结果为细胞膜和胞质呈黄色或棕色。统计结果显示c-kit+的阳性率在早期心肌缺血猝死组为76%，心肌梗死猝死组的阳性率为87%，两组无明显差异，正常心肌组阳性率为20%。早期心肌缺血猝死组与正常心肌组比较存在显著性差异（P＜0.05),心肌梗死猝死组与正常心肌组存在显著性差异（P＜0.05）。3. miRNA-206在不同分组中的表达RT-PCR结果显示miRNA-206的表达在早期心肌缺血猝死组和正常心肌组的心肌存在显著性差异（P＜0.01），在心肌梗死猝死组和正常心肌组的心肌存在显著性差异（P＜0.01），在早期心肌缺血猝死组和心肌梗死猝死组的心肌存在显著性差异（P＜0.05）。4. HMGB1和c-kit+在各组心肌中阳性表达的相关性分析在早期心肌缺血猝死组和心肌梗死猝死组中，HMGB1和c-kit+随着坏死心肌细胞的增加，其表达也相应的增加，二者呈正相关。结论1.各组心肌组织中部分心肌细胞胞膜或胞浆有c-kit+的表达，说明在心肌组织中存在心肌干细胞或者具有心肌干细胞特性的心肌细胞。2. HMGB1在三组心肌组织心肌细胞中的胞核均有阳性表达，早期心肌缺血猝死组和心肌梗死猝死组除胞核有阳性表达外，其胞浆中也有阳性表达，正常心肌组织心肌细胞胞浆为阴性。HMGB1在心肌梗死组的表达量高于早期心肌缺血猝死组。3.与正常心肌组相比，c-kit+在早期心肌缺血猝死组和心肌梗死猝死组中表达较多，且c-kit+在心肌梗死猝死组中的表达高于早期心肌缺血猝死组。4.与正常心肌组相比，miRNA-206在早期心肌缺血猝死组和心肌梗死猝死组中呈现高表达，且miRNA-206在心肌梗死猝死组的表达高于早期心肌缺血猝死组。5. HMGB1、c-kit+和miRNA-206在早期心肌缺血猝死心肌、心肌梗死猝死心肌中的高表达及HMGB1和c-kit+表达的正相关性可以作为诊断早期心肌缺血猝死法医学鉴定的辅助检查手段。