水稻低温条件下叶绿体发育必需基因TSV8的克隆和功能分析

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水稻是我国南方人民的主要的粮食之一。本实验通过对“嘉花1号”水稻的干种子使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)处理获得温敏感叶色突变体tsv8,然后对其进行性状分析、图位克隆和相关基因功能分析,得出以下结论:1、分析突变体tsv8在不同温度下叶色表型,发现在低温生长环境下,突变体tsv8在幼苗期的任何一个阶段叶色都出现白化现象,并且最终在4叶期后逐渐死亡。然而随着培养温度逐渐升高,突变体叶色会逐渐复绿。当水稻在32℃培养温度下,突变体tsv8的表型与野生型相同。2、通过测量突变体tsv8在不同温度条件下光合色素含量,检测结果表明突变体tsv8的叶色表型和光合色素含量存在紧密联系。低温生长条件下,突变体叶片颜色为白色,测量发现叶片内光合色素含量相比野生型有明显的下调,而温度升高,光合色素含量也出现恢复现象。3、将亲本突变体tsv8和培矮64S杂交产生的F2代群体作为遗传分析群体,发现性状分离,叶片绿色和白色分离比符合分离定律性状分离比3∶1,说明该突变体的低温敏感型叶色性状是由一个隐性核基因控制的。4、通过精细定位,将突变基因定位在水稻第8号染色体分子标记ID08M03982和ID08M04021之间,物理距离67kb。通过测序比对发现突变基因LOC_Os08g09270(TSV8)第三外显子外的第一个碱基C被另一个碱基T发生替换。这可能是突变体tsv8在低温生长条件下叶色白化的主要原因。5、对不同温度培养环境下的突变基因进行转录水平分析发现,基因TSV8的突变导致叶绿体发育相关基因在低温条件下表达量出现明显下调现象,而在高温条件下表达量和野生型差异不大。本研究报道了基因TSV8是一个低温敏感型编码五肽蛋白的水稻基因,它的突变可能抑制突变体在低温条件下的生理代谢反应和叶绿体正常生长。本突变体可作为研究低温胁迫下水稻耐低温性状的研究材料。
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