莱菔硫烷在人黑色素瘤A375细胞发生自噬中的作用研究

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目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对人黑色素瘤A375细胞自噬发生的影响及自噬在SFN抑制肿瘤细胞增殖中的作用。方法采用不同浓度梯度(0M、5×10-6M、1×10-5M、2×10-5M、4×10-5M)的SFN处理人黑色素瘤A375细胞1d后,借助MTT法,对细胞增殖率(PI)进行测定;借助实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),测定自噬行为相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1、P62m RNA表达水平;采用Western blotting分别检测与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62的表达情况。采用20μmol·L-1自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)预先处理人黑色素瘤A375细胞120min,接着通过各浓度的SFN(0M、5×10-6M、1×10-5M、2×10-5M、4×10-5M)对人黑色素瘤A375细胞进行1d作用,并借助MTT法对细胞增殖率进行检测。结果对于人黑色素瘤A375细胞增殖活性,SFN可发挥显著抑制作用,同时在SFN处理剂量提高下,A375细胞活性大幅减弱,呈现剂量反应关系(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,随着SFN干预剂量增加,LC3 m RNA,还有LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达的比值以及Beclin-1 m RNA以及蛋白表达也随之增多,不同的是P62 m RNA和蛋白表达下降(P<0.05)。自噬抑制剂CQ处理A375细胞后,SFN+CQ组细胞增殖活力显著低于SFN单独处理组(P<0.05)。结论SFN可以抑制人黑色素瘤A375细胞增殖活力,并且有促进细胞进行自噬的作用,而经由对自噬行为施以抑制,能够提升SFN抑制人黑色素瘤A375细胞增殖活性效应。
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