84K杨UPB1-Like基因的克隆及遗传转化

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UPBEAT1(UPB1)是一种调节拟南芥根部细胞分生分化平衡的转录因子,它直接作用于一系列过氧化物酶进而来调节细胞伸长区和分化区之间活性氧的表达。研究表明,当UPB1的活性遭到破坏时,活性氧的平衡受到影响,从而导致分化的延迟。值得注意的是UPB1调控活性氧平衡的途径是独立于植物生长素和细胞分裂素信号途径的。本研究利用生物信息学的方法在杨树数据库中查找到拟南芥UPB1的同源基因UPB1-Like1与UPB1-Like2,并克隆这两个基因,获得了417bp的UPB1-Like1CDS序列和408bp的UPB1-Like2CDS序列。半定量PCR结果显示,UPB1-Like基因在杨树幼茎和根部表达量较高,表明该基因可能在杨树的根部和茎部具有重要的生物学功能。瞬时表达结果显示杨树UPB1-Like基因定位于细胞核及细胞膜上。为深入探讨其生物学功能,本研究利用Gateway cloning system成功构建了杨树UPB1-Like的过表达(35S:UPB1-Like-GFP)及抑制表达(RNAi-Like12-pGWB2)载体,并将其在杨树及拟南芥植株中进行了过表达和抑制表达,共获得20个突变株系。与野生型相比,过表达UPB1-Like基因的杨树突变株系中均表现出茎短而细、节间距短、根短且根毛丰富等生物性状;而抑制表达UPB1-Like基因的杨树茎长而粗,节间距较长。这些结果表明,UPB1-Like对杨树根部和茎部的生长发育具有重要的调控作用。尤其对于其生长量的累积调控具有重要作用。因此,本项研究对于培育速生优质的林木新品种具有重要的生产实践意义。同时对于揭示杨树细胞分化和生长平衡的调节机制也具有重要的意义。
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