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第一部分
胃癌中GALNT9的表达及临床意义
目的研究胃癌组织/癌旁正常组织、胃癌细胞系中GALNT9的表达情况,探讨其临床意义。
方法免疫组织化学检测胃癌/癌旁正常组织、胃癌细胞系中GALNT9的表达情况,结合临床病理分析其临床意义。
结果胃癌癌旁正常组织中GALNT9的表达阳性率为86.3%,明显高于癌组织中的59.1%,两者差异性不显著(P=0.1425);GALNT9的表达阳性率与患者淋巴结转移(N分期)相关;GALNT9在胃癌细胞系MGC803中相对高表达,在7901中相对低表达。
结论GALNT9在部分胃癌组织中高表达,并与胃癌的淋巴结转移相关,提示GALNT9可能参与胃癌的浸润、转移等恶性生物学行为。胃癌细胞系MGC803、7901可用于进一步研究。
第二部分调控GALNT9表达对胃癌细胞生物学行为的影响及EMT机制的研究
目的通过在MGC803中沉默GALNT9的表达,观察沉默表达后胃癌细胞生物学行为变化;而在7901中过表达GALNT9基因,观察过表达后胃癌细胞生物学行为变化。
方法设计siGALNT9及阴性siRNA,以脂质体reagent转染胃癌MGC803细胞系,Western-blot检测转染后胃癌MGC803细胞蛋白表达水平的变化情况;设计沉默表达慢病毒Lv-GALNT9-RNAi及阴性对照病毒CON077(hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin),以polybrene生物安全柜中协助病毒转染细胞得到稳转细胞系。Western-blot检测病毒转染后胃癌MGC803细胞、质粒过表达后GALNT9蛋白表达水平、EMT相关蛋白及信号通路蛋白Akt/mTOR/STAT3的变化情况。采用Transwell检测细胞的迁移能力变化;采用平板克隆检测细胞增殖变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;采用裸鼠皮下成瘤技术检测细胞的成瘤能力并行瘤体免疫组化。
结果siGALNT9可明显沉默MGC803细胞中GALNT9蛋白表达水平,且MGC803细胞的迁移能力、增殖能力增强,凋亡减少;7901细胞成功转染过表达质粒后,其细胞中GALNT9蛋白表达水平增高,细胞的迁移能力、增殖能力减弱、凋亡增加。沉默MGC803中GALNT9基因,EMT相关蛋白:Zo-1、E-cad、Vimentin表达水平下降;过表达7901中GALNT9基因则上述蛋白表达升高。沉默MGC803中GALNT9表达可抑制Akt/mTOR/STAT3信号通路,过表达7901中GALNT9表达可激活Akt/mTOR/STAT3信号通路。沉默MGC803组GALNT9后的Lv-siGALNT9组裸鼠成瘤瘤体大于Con组,瘤体标本免疫组化示:Lv-siGALNT9组Ki67百分比明显低于Con组。
结论沉默GALNT9可促进胃癌细胞的EMT。胃癌细胞系中GALNT9参与Akt/mTOR/STAT3信号通路,并发挥重要调节功能。GALNT9在胃癌细胞中起抑癌基因作用。
胃癌中GALNT9的表达及临床意义
目的研究胃癌组织/癌旁正常组织、胃癌细胞系中GALNT9的表达情况,探讨其临床意义。
方法免疫组织化学检测胃癌/癌旁正常组织、胃癌细胞系中GALNT9的表达情况,结合临床病理分析其临床意义。
结果胃癌癌旁正常组织中GALNT9的表达阳性率为86.3%,明显高于癌组织中的59.1%,两者差异性不显著(P=0.1425);GALNT9的表达阳性率与患者淋巴结转移(N分期)相关;GALNT9在胃癌细胞系MGC803中相对高表达,在7901中相对低表达。
结论GALNT9在部分胃癌组织中高表达,并与胃癌的淋巴结转移相关,提示GALNT9可能参与胃癌的浸润、转移等恶性生物学行为。胃癌细胞系MGC803、7901可用于进一步研究。
第二部分调控GALNT9表达对胃癌细胞生物学行为的影响及EMT机制的研究
目的通过在MGC803中沉默GALNT9的表达,观察沉默表达后胃癌细胞生物学行为变化;而在7901中过表达GALNT9基因,观察过表达后胃癌细胞生物学行为变化。
方法设计siGALNT9及阴性siRNA,以脂质体reagent转染胃癌MGC803细胞系,Western-blot检测转染后胃癌MGC803细胞蛋白表达水平的变化情况;设计沉默表达慢病毒Lv-GALNT9-RNAi及阴性对照病毒CON077(hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin),以polybrene生物安全柜中协助病毒转染细胞得到稳转细胞系。Western-blot检测病毒转染后胃癌MGC803细胞、质粒过表达后GALNT9蛋白表达水平、EMT相关蛋白及信号通路蛋白Akt/mTOR/STAT3的变化情况。采用Transwell检测细胞的迁移能力变化;采用平板克隆检测细胞增殖变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;采用裸鼠皮下成瘤技术检测细胞的成瘤能力并行瘤体免疫组化。
结果siGALNT9可明显沉默MGC803细胞中GALNT9蛋白表达水平,且MGC803细胞的迁移能力、增殖能力增强,凋亡减少;7901细胞成功转染过表达质粒后,其细胞中GALNT9蛋白表达水平增高,细胞的迁移能力、增殖能力减弱、凋亡增加。沉默MGC803中GALNT9基因,EMT相关蛋白:Zo-1、E-cad、Vimentin表达水平下降;过表达7901中GALNT9基因则上述蛋白表达升高。沉默MGC803中GALNT9表达可抑制Akt/mTOR/STAT3信号通路,过表达7901中GALNT9表达可激活Akt/mTOR/STAT3信号通路。沉默MGC803组GALNT9后的Lv-siGALNT9组裸鼠成瘤瘤体大于Con组,瘤体标本免疫组化示:Lv-siGALNT9组Ki67百分比明显低于Con组。
结论沉默GALNT9可促进胃癌细胞的EMT。胃癌细胞系中GALNT9参与Akt/mTOR/STAT3信号通路,并发挥重要调节功能。GALNT9在胃癌细胞中起抑癌基因作用。