儿童麻疹疫苗接种后远期疫苗特异性初始T细胞及记忆T细胞的表型研究

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目的:通过研究儿童接种麻疹疫苗远期特异性初始T细胞和记忆T细胞的表型特征,为接种麻疹疫苗的远期效果和新的接种策略提供理论指导。方法:(1)在家长志愿的基础上选择2003年12月~2010年9月在深圳市龙岗区妇幼保健院接种麻疹疫苗的3~10岁儿童为研究对象32例;(2)抽取外周静脉血3ml,分离淋巴细胞加入麻疹疫苗进行培养,设加麻疹疫苗组为实验组,未加疫苗组为对照组,置5%CO2、37℃培养箱中培养50h;以FCM分别检测细胞表面分子:CD4/CD8、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7;(3)外周静脉血分离淋巴细胞加入麻疹疫苗进行培养,实验设未加疫苗组为对照组,置5%CO2、37℃培养箱中培养50h后加入CCK-8试剂继续培养1h;以CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞增殖指数。结果:(1)对麻疹疫苗接种32例儿童外周血细胞进行分离培养,以FCM检测CD4+、CD8+细胞,结果外周血PBMC中CD4+和CD8+T细胞所组成比例以CD4+T细胞为优势,经统计学处理有显著性差异P﹤0.05。(2)用FCM检测CD4+/CD8+CD45RA+初始T细胞亚群,CD4+CD45RA+初始T细胞对照组与实验组均高达70%以上;CD8+CD45RA+初始T细胞对照组与实验组均高达80%以上,组间比较均无显著差异,P﹥0.05;同时按照抗体水平高低分三组进行比较,组间比较均无显著差异,P﹥0.05。(3)用FCM检测CD4+/8+CD45RO+记忆T细胞亚群,CD4+CD45RO+对照组28.12%,实验组29.55%,二组比较均无显著差异,P﹥0.05;CD8+CD45-RO+对照组17.35%,实验组21.89%,二组比较均无显著差异,P﹥0.05;同时按照抗体水平高低分三组进行比较,组间比较均无显著差异,P﹥0.05。(4) CD4+记忆T细胞根据归巢受体(CD62L)和趋化因子受体(CCR7)的表达,CCR7+亚群检测对照组84.37%,实验组84.47%,CD62L+亚群检测对照组93.60%,实验组95.00%,组间比较无显著差异,P﹥0.05。CD8+记忆T细胞CCR7+亚群检测对照组47.24%,实验组50.55%;CD62L+亚群检测对照组61.30%,实验组65.89%,组间比较无显著差异,P﹥0.05。(5)按麻疹疫苗接种后3-5年、6-7年、8-10年的不同时间分析CD4/CD8细胞CD45RA+、CD45RO+、CCR7+和CD62L+不同亚群,结果疫苗接种后不同时间T细胞的亚群均无差异,P﹥0.05。(6)应用CCK-8法检测疫苗刺激后疫苗特异性细胞增殖情况,检测结果可见细胞增殖指数均大于0.8,大于1.0在本研究中为17例,占54.84%。结论:(1)麻疹病毒是细胞内感染,因此对麻疹疫苗诱导机体的免疫力,研究记忆细胞具有十分重要的意义,本研究表明麻疹疫苗接种儿童T细胞以CD4+为优势细胞,其初始T细胞CD45RA+高达70%~80%。(2)麻疹疫苗接种儿童根据CD45RA-/CD45RO+的表达,CD8+记忆T细胞在17%左右,CD4+记忆T细胞高达28%~29%,记忆T细胞与抗体水平高低无关,其CD4+记忆T细胞为主要表型特征。(3)麻疹疫苗接种儿童根据CCR7和CD62L表达进一步研究发现,记忆T细胞亚群具有多样性,本研究均以中央型记忆细胞为主要表型特征;细胞增殖指数大于1的高达54.84%,表明疫苗特异性记忆细胞增殖良好。
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