【摘 要】
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目的:探讨miR-15b对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4和HL-60细胞分化和增殖的影响及其相关作用机制。方法:用1μM的ATRA分别处理NB4和HL-60细胞0h,24h,48h,72h后,qRT-PCR检测miR-15b的表达;将miR-15b mimics/scramble和anti-15b/anti-con分别转染进NB4和HL-60细胞后,同时在ATRA的处理下,瑞氏-吉姆萨染色后镜下
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目的:探讨miR-15b对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4和HL-60细胞分化和增殖的影响及其相关作用机制。方法:用1μM的ATRA分别处理NB4和HL-60细胞0h,24h,48h,72h后,qRT-PCR检测miR-15b的表达;将miR-15b mimics/scramble和anti-15b/anti-con分别转染进NB4和HL-60细胞后,同时在ATRA的处理下,瑞氏-吉姆萨染色后镜下观察细胞的形态学变化,计算分化细胞的比例;流式细胞术检测髓系分化标志CD11b的表达;qRT-PCR检测粒系分化指标CD11b和CSF3R的mRNA表达;CCK-8实验检测细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞的周期变化;运用生物信息学对miR-15b的下游靶基因cyclinE1作用位点进行预测;western blot检测cyclinE1,Rb,p-Rb的蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-15b与cyclinE1的3’UTR端的结合情况;使用siRNA技术敲低cyclinE1后,检测NB4和HL-60细胞增殖和分化的相关指标,western blot检测Rb,p-Rb蛋白表达。结果:ATRA可以促进miR-15b在NB4和HL-60细胞中的表达且呈时间依赖的方式;与单独使用ATRA处理细胞相比,用ATRA处理已经转染miR-15b mimics的NB4和HL-60细胞,CD11b阳性细胞的比例明显增加,细胞形态向成熟粒系发展且分化细胞数量增多,细胞CD11b和CSF3R的mRNA表达增加;而抑制miR-15b表达则抑制ATRA促分化能力;CCK-8实验结果显示miR-15b可以抑制NB4和HL-60细胞的增殖;细胞流式术检测发现转染miR-15b mimics后阻滞于G0/G1期的细胞数量增多;生物信息学提示cyclinE1是miR-15b的下游靶基因;过表达miR-15b可以抑制cyclinE1及下游p-Rb的表达,抑制miR-15b则促进cyclinE1及下游p-Rb的表达;双荧光素酶报告结果显示miR-15b可以与cyclinE1的3’UTR端直接结合;抑制cyclinE1的蛋白表达可以促进了NB4和HL-60细胞分化,抑制细胞增殖。结论:MiR-15b可以通过抑制cyclinE1的蛋白表达从而增强ATRA对NB4和HL-60细胞的促分化能力,抑制细胞增殖。
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