【摘 要】
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目的:1.检测人结直肠癌组织与正常组织中UHRF1蛋白表达的情况,研究UHRF1与结直肠癌之间的可能关系。2.探讨过表达和敲减UHRF1后对结直肠癌细胞（SW480、HCT116）生物学特性带来的影响。3.分析UHRF1与WNT信号通路中WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9等相关分子的关系,探求其与结直肠癌细胞生物学特性间的可能分子途径。方法:1.免疫组织化学染色实验检测56例
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目的:1.检测人结直肠癌组织与正常组织中UHRF1蛋白表达的情况,研究UHRF1与结直肠癌之间的可能关系。2.探讨过表达和敲减UHRF1后对结直肠癌细胞（SW480、HCT116）生物学特性带来的影响。3.分析UHRF1与WNT信号通路中WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9等相关分子的关系,探求其与结直肠癌细胞生物学特性间的可能分子途径。方法:1.免疫组织化学染色实验检测56例人结直肠癌组织与56例癌旁正常组织的UHRF1的表达。2.qPCR和Western blot同时检测UHRF1在四株结直肠癌细胞株中的表达情况,选用表现为低表达UHRF1的SW480细胞来构建过表达的稳定转染株,高表达UHRF1的HCT116细胞则作为沉默组细胞株的载体。3.设置对照组和实验组（UHRF1过表达组或UHRF1沉默组）,通过q PCR和Western blot验证稳转株是否构建成功。检测各组细胞株中WNT信号通路分子WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9的表达情况。再分别测定运用IWP-2（WNT拮抗剂）和HLY78（WNT活化剂）处理后的实验组细胞的WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9分子的表达。4.将病毒转染前后各组细胞株运用EDU细胞增殖实验来测定增殖细胞数量的变化;同时,通过Transwell小室检测并分析迁移和侵袭入腔室下层的细胞数量的变化情况。结果:1.与正常组织相比,UHRF1蛋白在人结直肠癌组织中的表达更高（p<0.005）。2.实时荧光定量PCR和蛋白印迹实验筛选发现在四株细胞株中SW480细胞UHRF1mRNA和蛋白的表达相对较低,而HCT116细胞则表达相对偏高。选取SW480和HCT116构建稳定高表达与沉默UHRF1的实验组细胞,与对照组细胞进行比较后（p<0.01）,证明两株细胞稳转株成功构建。3.慢病毒转染后构建的UHRF1过表达细胞与空白对照组和阴性对照组细胞相比,蛋白印迹实验结果显示过表达UHRF1能够促进WNT信号通路中WNT3a、GSK3β、MMP9分子的蛋白表达,同时抑制p-β-catenin的表达（p<0.05）。用IWP-2（WNT拮抗剂）处理过表达细胞株后,检测上述通路分子蛋白表达发现WNT3a、GSK3β、MMP9的表达减少,p-β-catenin的表达增加（p<0.05）。同样,在慢病毒转染沉默UHRF1实验中,WNT3a、GSK3β、MMP9的蛋白表达受到抑制,而p-β-catenin表达则有显著提升（p<0.05）。再经HLY78（WNT活化剂）处理后,WNT3a、GSK3β、MMP9的表达明显较先前上调,p-β-catenin表达则处于下调趋势（p<0.05）。推测UHRF1与WNT信号通路存在一定的相关关系。4.EDU实验检测各组细胞,与对照组比较,UHRF1表达增加可使细胞增殖能力增强;同时UHRF1的表达亦可使得迁移和侵袭入下层的细胞数明显多于对照组。IWP-2（WNT拮抗剂）处理相关细胞株后,细胞的增殖、迁移及侵袭能力则受到抑制。推测UHRF1能够通过WNT信号通路影响结直肠癌细胞的生物学特性。结论:1.与癌旁正常组织相比,UHRF1蛋白在人结直肠癌组织中的表达更高。2.UHRF1基因可能可以通过WNT信号通路来影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学特性。
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