沙眼衣原体感染后HeLa-229细胞的miRNA差异表达及其功能研究

被引量 : 3次 | 上传用户:qtl8866
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目的]miRNA是近些年来新发现的一类能够调控其靶基因表达水平的小分子RNA家族。目前,1miRNA的功能研究主要集中于生长发育、肿瘤发生、细胞增殖、细胞凋亡等方面,随着研究的不断深入,发现1miRNA参与了病毒和细菌这些病原微生物与宿主细胞的相互作用过程。本研究的初衷在于进一步探索:miRNA在微生物感染宿主细胞过程中所发挥的作用及其调控机制,拓展我们关于miRNA功能的认识。[方法]首先在本实验室建立沙眼衣原体的体外培养模型,使用HeLa-229作为宿主细胞培养扩增沙眼衣原体。并通过方法的改进提高了衣原体感染宿主细胞的效率,使绝大多数细胞都被沙眼衣原体感染,为之后的miRNA表达谱芯片实验提供更好的基础,而后使用miRNA表达谱芯片检测沙眼衣原体感染宿主细胞后,细胞中各个miRNA的表达水平的变化。从中筛选表达水平变化最为显著的一些,并结合已有的关于这些miRNA的研究进展进行综合分析,选取一些最有可能与衣原体感染相关的miRNA作为后续研究的候选者。最后针对这些候选的miRNA,根据其参与的生长调控,凋亡等不同机制,在衣原体感染这个模型的基础上,通过ASO技术封闭其功能;而后选择适当的实验对一些细胞生物学指标,如细胞生长曲线、Hoechst法凋亡检测等指标进行检测,以此来评估这止匕miRNA在衣原体感染过程中所发挥的作用。[结果]1.成功建立了E血清型沙眼衣原体的体外细胞感染模型,并成功的提高了其感染效率。2.通过miRNA表达谱芯片这种高通量的筛选方法筛选得到了14个表达水平明显变化的miRNA。其中9个在感染衣原体的细胞中表达水平明显上调,5个表达水平明显下调。3.根据1miRNA表达谱芯片的结果提示,发现通过人为的封闭表达水平上升的9个niRNA的功能,使得沙眼衣原体在感染这种细胞后最终复制产生的子代衣原体明显减少;通过生长曲线实验证明has-miR-190、has-miR-372的低表达可以明显的抑制HeLa-229细胞的分裂增殖。由此推断沙眼衣原体感染后通过改变这两个miRNA的表达水平对宿主细胞的分裂增殖活性产生影响,最后通过Hoechst凋亡检测证实了has-miR-15、has-miR-16同时参与了衣原体感染后所诱导的宿主细胞凋亡过程,并发挥着明显的作用。[结论]沙眼衣原体感染宿主细胞后对宿主细胞中多个miRNA的表达水平产生影响,而这些miRNA在衣原体感染和复制中发挥着明显的作用,尤其是has-miR-190、has-miR-372、has-miR-15a、has-miR-16分别通过调节宿主细胞的增殖和凋亡在感染过程中发挥作用。这些发现为进一步研究miRNA对衣原体感染的影响、阐明衣原体的感染机理提供了稳定的感染模型和大量有意义的线索。也为开发新的抗衣原体感染的治疗手段提供了新的理论基础。
其他文献
<正> 一、用评分法评价功能的两种形式的特点及其适用性。 1.用评分法评价产品功能时有两种形式:一种以功能为对象的评价形式(简称形式Ⅰ);另一种以零部件为对象的评价形式(
随着现代经济的不断发展,我国的社会主义物质文明和精神文明取得很大的进步,居民生活水平、医疗卫生水平也在不断提高,人们也越来越重视身体健康问题。身体是人最重要的本钱,当身
倡导新课程改革以来,对话教学颠覆了传统的教学方式,作为一种全新的教学理念进入了课堂。相对于过去以教师独白表演为主的传授型教学而言,它是一种以沟通交流为主的对话型教
<正>人类自称为万物之灵。人区别于动物之最重要标志就是拥有动物所无法比拟的、极为发达的大脑。揭开脑的奥秘一直是科学工作者追求的目标,也是对他们最大的挑战。近来拜读
雷电灾害作为一种常见自然灾害,在全球范围内普遍存在,并对地面上的建筑、电子产品、人畜等构成一定危害,因此研究雷电的发生、演化规律具有重要意义。采集雷电发生时的电场
公共服务民营化改革在世界各国风靡了数十年,在提高公共服务水平及降低政府成本方面有显著效果,但同时伴随地是层出不穷的问题,世界各国出现逆向民营化浪潮。如新西兰在2001年将
核磁共振测井仪是根据油井储层中不同流体的核磁共振响应特性有较大的差别设计的一种探测仪器,可以利用这一差别区分烃的类别,还可以定量计算它们的体积。通过核磁共振测井仪的
[目的]探讨医疗保险个人账户是否有存在的必要性。[方法]将方案设计的初衷与实际运行相比较分析。[结果]医疗保险个人帐户约束和积累作用发挥得不理想,在一定程度上抑制了老年
我国大部分股份公司,由于特殊的时代背景,普遍存在着控制股东。控制股东作为公司中的资本多数派,掌握着公司的控制权。他们在做出决定或进行其他行为时,本应从整个公司的利益出发
改革开放以来,中国农村的经济体制、政治结构、社会结构、利益格局经历着“大转型”。随之而来的是利益主体更加多元、社会稳定影响因素更加复杂、乡村治理张力更加扩大。作