目的 关于缺血后脑损伤的机制，目前较多的研究兴趣集中在脑缺血再灌注后的炎症反应。梗死后参与脑组织损伤的炎细胞包括内源性(小胶质细胞)和外源性(多形核白细胞、中性粒白细胞、单核细胞)。神经元死亡或者亚致死都可引起小胶质细胞和单核细胞的激活。活化的小胶质细胞和血源性单核细胞可释放毒性产物、产生吞噬作用和免疫反应加速神经元死亡，对缺血性脑损伤起促进作用。有研究表明活化的小胶质细胞是脑缺血后TNF-α的主要来源。TNF-α能启动和调节组织局部炎症反应，是控制脑缺血再灌注损伤的主要细胞因子。 近期大量研究证实作为经典抗凝剂已广泛应用于临床的肝素是强有力的抗炎制剂。其抗凝及抗炎作用是通过肝素分子上不同基团实现的。但这些研究多局限于非缺血性疾病或心肌缺血性疾病，关于肝素对脑缺血后局部炎性反应有无影响研究很少，国内尚无相关报道。本研究将低分子肝素应用于脑缺血后大鼠，旨在探讨低分子肝素对小胶质细胞、单核细胞活化及炎性介质TNF-α的表达有无影响，为肝素应用于临床提供新的药理学依据，为开发新的抗炎制剂提供理论依据。 材料与方法 清洁级wistar大鼠，体重250-350g。随机分为缺血2小时后分别再灌注3、24、48、72小时注射用水对照组，速碧林治疗组，假手术组，正常对照组，每组各5只。用longa法制备大鼠脑缺血再灌注模型。至相应时间点后，各组大鼠在麻醉下开胸，用0.9％生理盐水经左心室快速灌流，迅速取脑并置液氮罐内保存。 方法： 1．免疫荧光方法：脑组织进行半导体冰冻冠状切片O0pm人进行免疫荧光染色及HE染色。 2．免疫组化方法：冰冻切片完成后，取24小时组及假手术组、正常对照组脑组织，石蜡包埋，进行石蜡切片Kp叫，进行免疫组化染色及HE染色。 3．统计学处理：采用半定量分析方法，计数梗死灶周围不相交叉 8个高倍视野中的阳性细胞数，数据进行 t检验，P ＄ 0．05有统计学意义。 结 果 1．小胶质细胞、单核细胞活化的特点：3小时组即可见较少阳性细胞，条状或带状分布。24－48小时阳性细胞增多，呈环状或带状分布于梗死灶周围。72小时与48小时相比梗死灶周边阳性细胞减少，但梗死灶内可见中等量阳性细胞，细胞形态大而圆。 2．TNF－a表达细胞的分布特点：阳性细胞主要分布于梗死灶周围，与活化小胶质细胞、单核细胞分布基本一致。 3．低分子肝素对小胶质、单核细胞活化的影响：低分子肝素治疗组与对照组相比，24户8＊2小时组均可见治疗组梗死灶周围阳性细胞明显减少〔分别为46．6792。7．0719对31．3833。5．4743（P（O．00二），＊7．35＊2。7．＊09O又 ＊8．3二08。8．41 19（PSO．00二），38．8583土5．2119对37．3“8土3．Q6O（P＜0．002）」。 4．低分子肝素对缺血 2 ／J’时再灌注 24 ／J’时后 TNF－a表达的影响：低分子肝素治疗组与对照组相比可见治疗组阳性细胞明显减少k5．％67。5．8053对2二．9583。6．085（PSO．皿1）】。 ·2· 讨 论 本研究在大鼠脑缺血后用低分子肝素治疗，观察小胶质、单核细胞活化及TNF－。表达的变化。所得结果，肝素对大鼠脑缺血2小时再灌注24－72小时后的小胶质细胞、单核细胞活化及缺血2小时再灌注24 ／J’时后的TNF—a表达有明显抑制作用。 很多研究表明，脑缺血后炎症反应与小胶质、单核细胞活化，分泌炎性介质有关。脑缺血后小胶质细胞迅速向损伤区迁移、增生、活化，同时单核细胞浸润＼活化。本研究的结果与Lees GL等的发现一致，缺血3小时后小胶质细胞、单核细胞开始迅速活化，24／8小时后增多，主要分布于梗死灶周围，缺血72小时后不仅梗死灶周围，梗死区内也可见阳性细胞。大量研究发现TNF－a是介导脑缺血损伤的重要的炎性介质，也有作者发现TNF－。主要是由活化的小胶质细胞分泌的，本研究也发现脑缺血后TNF一a阳性细胞增多并与活化小胶质细胞及单核细胞分布区域基本相似。目前抑制炎症反应制剂较多，但应用于脑缺血治疗的却很少。肝素作为抗凝剂及抗血栓形成剂用于临床已60余年，近期大量研究发现肝素是强有力的抗炎制剂。治疗机制与其对免疫反应及炎性反应的抑制有关。关于肝素的抗炎机制目前的研究结果认为主要是通过阻断P一及L一选择素始动的细胞新附实现的，同时肝素也可能通过抑制炎症瀑布反应的其他步骤而起作用。而且认为其抗炎作用是孤立于抗凝活性之外的。关于肝素的抗炎作用的研究国外多集中于非缺血性疾病或心肌缺血，对脑缺血的研究很少，国内尚无相关报道。关于对小胶质细胞活化的影响的研究也局限于体外培养条件下。本研究将其应用于大鼠脑缺血后，发现其应用于实验动物时对脑缺血后局部炎症反应也有抑制作用。相信其作为抗炎、抗凝制剂或改变结构仅作为抗炎制剂应用于临床的前 ·3·景是很光明的。