猪源口蹄疫病毒的分离与鉴定

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根据流行病学调查,临床症状检查,从发病的猪群采集病料(水泡皮和水泡液),通过BHK-21细胞接种传代分离到二株口蹄疫病毒,分别命名为CS株和SD株。对其培养特性、形态学特征、理化特性、血清学试验、核酸类型、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及动物感染等方面进行了鉴定。用半数组织感染量(TCID50)对分离株进行了毒力测定。结果表明:分离株能很快适应BHK-21细胞,并产生明显的细胞病变(CPE)。分离株对酸碱和高温敏感,而对脂溶剂具有较强的耐受性。病毒核酸类型是RNA。用反向间接血凝试验测定其细胞毒CS株F5的血凝价为24,SD株F7细胞毒的血凝价为25。提取病毒感染细胞总RNA进行多重RT-PCR扩增,结果出现大小为634bp、483bp、278bp三条目的DNA片段。用分离到的细胞毒感染豚鼠后引起典型的症状和病变,口蹄疫血清抗体效价CS株由接种前的不凝集上升到24,SD株由接种前的不凝集上升到27;分离到的细胞毒感染乳鼠后引起乳鼠死亡。CS株F5TCID50值为2-4.2/0.2ml;SD株F7TCID50值为2-9.2/0.2ml。根据分离株的形态学、培养特性、理化特性、血清学试验、RT-PCR和动物感染等鉴定,确证CS、SD两分离株为“O”型口蹄疫病毒。
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