【摘 要】
:
目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,严重威胁女性健康。化疗耐药是乳腺癌治疗失败的主要原因,也是影响临床患者预后的重要因素。临床上大约有30-80%的肿瘤细胞在化疗过程中产生耐药导致化疗的失败,90%以上癌症患者的死亡是由多药耐药导致的。因此,如何克服化疗耐药是目前临床亟待解决的关键问题。外泌体是细胞分泌的直径为30-150nm的小囊泡,它广泛存在于人的体液中,并且可以携带蛋白质、RNA等多
论文部分内容阅读
目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,严重威胁女性健康。化疗耐药是乳腺癌治疗失败的主要原因,也是影响临床患者预后的重要因素。临床上大约有30-80%的肿瘤细胞在化疗过程中产生耐药导致化疗的失败,90%以上癌症患者的死亡是由多药耐药导致的。因此,如何克服化疗耐药是目前临床亟待解决的关键问题。外泌体是细胞分泌的直径为30-150nm的小囊泡,它广泛存在于人的体液中,并且可以携带蛋白质、RNA等多种生物因子。有研究证明,外泌体可以在细胞之间传递耐药信息,导致敏感细胞的耐药性增强。MMP1是基质金属蛋白酶家族中的一员,它在阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR中的表达高于敏感细胞系MCF-7,且敲除MMP1基因可降低MCF-7/ADR细胞的耐药性。本实验通过将耐药细胞株分泌的外泌体与其敏感细胞株共培养,探讨MMP1可否通过外泌体这一途径传导耐药信息,为探寻肿瘤细胞化疗耐药的机制提供新的思路。方法:1.用RT-PCR检测MMP1在乳腺癌MCF-7细胞、MCF-7/ADR细胞以及MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231/ADR细胞中的表达水平。2.超速离心法提取上述四种的外泌体,并对提取的外泌体进行鉴定。3.用流式细胞术、免疫电镜检测MMP1在MCF-7细胞外泌体、MCF-7/ADR细胞外泌体以及 MDA-MB-231 细胞外泌体、MDA-MB-231/ADR细胞外泌体上的表达水平。4.将MCF-7/ADR细胞外泌体和MDA-MB-231/ADR细胞外泌体用PKH67标记后,共聚焦显微镜观察MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞对其耐药株外泌体的摄取情况。5.用CCK-8检测MCF-7细胞与以及MDA-MB-231细胞与其耐药株外泌体共培养后对阿霉素IC50的变化。6.用 RT-PCR 和 Western Blot 技术检测 MCF-7 细胞以及 MDA-MB-231 细胞与ADR/EXO共培养后MMP1的表达水平。7.用免疫组化技术检测MMP1在新辅助化疗耐药患者和敏感患者病理组织中的表达水平。8.用流式细胞术检测新辅助化疗耐药患者和敏感患者的血浆外泌体中MMP1的表达水平。结果:1.耐药株MCF-7/ADR中MMP1基因的相对表达量是其敏感株MCF-7的19.60倍,耐药株MDA-MB-231/ADR中MMP1基因的相对表达量是其敏感株MDA-MB-231的14.40倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.透射电镜观察外泌体呈现出典型的杯口状或类似橄榄球的椭圆形,大小在40-150nm左右。Western Bloting检测外泌体的标记蛋白CD81在外泌体上高表达,而细胞内质网的特异性分子Calnexin在外泌体上低表达。3.免疫电镜显示耐药细胞株外泌体周围的金颗粒数量明显多于敏感细胞外泌体,说明MMP1在ADR/EXO中含量更高,差异具有统计学意义(P<0.01)。4.流式细胞术检测MCF-7/ADR外泌体中MMP1的相对表达量是其敏感株MCF-7外泌体的2.15倍,MDA-MB-231/ADR外泌体中MMP1的相对表达量是其敏感株MDA-MB-23 1外泌体的1.21倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。5.激光共聚焦显微镜观察到耐药细胞分泌的外泌体可以被敏感细胞摄取,且摄取量随着共培养时间的延长有所增加。6.Western blot 检测 MCF-7+ADR/EXO 的 MMP1 相对表达量是 MCF-7 的2.4 倍,差异具有统计学意义(P<0.05),MDA-MB-231+ADR/EXO 的 MMP1相对表达量是MDA-MB-231的1.64倍,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测MCF-7+ADR/EXO的MMP1 mRNA相对表达量是MCF-7的6.02倍,差异具有统计学意义(P<0.01),MDA-MB-23 1+ADR/EXO 的 MMP1 mRNA 相对表达量是MDA-MB-231的1.64倍,差异有统计学意义(P<0.01)。7.CCK-8检测MCF-7与其耐药株外泌体共培养后,IC50升高了 2.97倍,差异有统计学意义(P<0.05),MDA-MB-231与其耐药株外泌体共培养后,IC50升高了 2.95倍,差异有统计学意义(P<0.05)。8.免疫组化检测在新辅助化疗患者乳腺肿瘤组织,耐药组MMP1表达水平明显高于敏感组。流式细胞术检测耐药患者血浆外泌体中MMP1表达水平明显高于敏感患者。结论:1.MMP1在乳腺癌耐药细胞株高表达。2.耐药细胞外泌体中MMP1的表达高于敏感细胞外泌体。3.携带MMP1的外泌体可以被细胞摄取并传递耐药性。4.外泌体来源的MMP1可以作为检测乳腺癌化疗耐药的指标。
其他文献
按照现在的生产速度,预计将于几十年内化石燃料将会开采殆尽。氢气作为一种具有洁净、环保等特点极有前景的能源载体,被认为是可替代化石燃料的绿色新能源备受瞩目。传统制氢方法通过低成本的天然气来生产的,但是这种方法会产生大量CO2副产品。而利用丰富的太阳能资源将水分解成氢气是一种绿色,清洁的制氢途径。自1972年TiO2分解水被报道以来,光催化分解水一直是研究热门。在过去的几十年里已经开发了许多半导体光催
3D打印技术近年来发展十分迅速,社会生产的各个方面都能见到3D打印技术的相关产品,该技术涉及机械、机电、计算机、互联网和材料等多个学科领域。熔融沉积式3D打印技术凭借操作简便、高效和低成本的特点在市场上应用极为广泛,但也出现了如打印尺寸受限制、打印质量不佳、打印效率低和打印原材料要求较高等问题。因此该技术仍需进行深入研究与开发。本文结合熔融沉积式3D打印技术和螺杆挤出原理提出一款工业级3D打印试验
聚氨酯材料综合性能优异、产品形式多样、成型工艺简单,因其能够满足市场多样化需求而受到广泛关注。其中,六亚甲基二异氰酸酯(HDI)/聚己内酯(PCL)型聚氨酯由于高柔韧性、易降解、降解产物无毒以及良好的药物渗透性,在生物医用材料领域应用广泛。目前HDI/PCL型聚氨酯的研究较多注重于综合性能(力学、生物)的提升,实际上,聚氨酯的性能最终取决于其凝聚态结构,特别是其特有的分子结构中软段与硬段微相分离的
2016年国务院首次提出“幸福产业”的概念,随即国家又出台了多项措施大力为幸福产业消费提质扩容。医疗健康行业作为幸福产业中重要的板块之一,是银行等金融机构重点支持的朝阳行业。目前,我国医疗行业仍以公立医院为主导,受单位属性和管理体制的制约,目前医院行业主要采取金融机构贷款方式补充资金需求。然而,现阶段我国商业银行在为事业单位法人进行授信决策时,其管理水平相对较低,特别是对公立医院的信用评价分析和融
随着经济全球化进程的不断深入与计算机信息技术的迅速发展,大数据时代到来。目前我国公立医院正集中于财务业务一体化建设,对医疗服务收支、财务核算等传统的系统模块进行技术升级改造,增强信息与计算机的互通性,顺应了国家卫计委在2015年提出的《卫生计生财务工作要点》的指导方向。同时,查尔斯霍夫曼于1998年提出了可扩展商业报告语言(XBRL,Extensible Business Reporting La
随着柔性可穿戴设备、便携设备的迅速兴起和发展,柔性可穿戴传感器在个人护理、运动和健康监测以及物联网应用方面表现出了巨大的潜力。电阻式柔性压力传感器具有响应速度快、灵敏度高、内部结构可控、制备工艺简单等优点,受到了研究者们的广泛关注。它通常由柔性高分子材料与导电材料组成,在外界作用力下,利用传感器电阻的变化实现力和电信号的转化。但是传统的合成高分子材料不可降解,大量使用会造成电子垃圾的产生,从而阻碍
镁锂合金是目前密度最低的金属结构材料,因其塑性好、比刚度和比强度高,且符合轻量化的发展理念,在航天、武器、电子等领域备受关注。然而铸态镁锂合金自身强度较低,限制了其进一步发展。研究表明,通过合金成分调控、热处理的方式能够改善其力学性能。本文以综合力学性能良好的双相Mg-Li合金为研究对象,采用真空感应熔炼制备Mg-10Li-3Al-3Zn-xY(x=0、0.5和1.0 wt.%)合金铸锭,对强度最
目的:研究 NONMMUT028949.2(lnc949)在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)中的作用;探讨 lnc949 通过其宿主基因 FKBP5(FK506 binding protein 5,FKBP5)调控自噬的分子机制。方法:根据lnc949的全长序列设计特异性针对lnc949的干扰序列和构建过表达载体,并分别转染L929细胞(小鼠成纤维细胞系),下调或上调lnc9
镁合金作为典型的轻质合金,具有高比强度、高比刚度等优点,在航空航天、国防和3C等领域具有广阔的应用前景。镁合金的可靠连接可以有效拓宽轻量化材料的应用范围,目前“以焊代铆”成为工业连接技术的发展趋势,因此对镁合金焊接接头力学性能提出了更高的要求。然而镁合金由于熔点低且化学性质活泼,在焊接过程易产生缺陷,导致接头力学性能不足,限制了其进一步应用。研究表明,复合化接头是一种有效改善接头性能的重要手段。本
目的:1.调查梗阻性黄疸患者合并肌肉减少症的发病率,并探讨其相关影响因素。2.建立梗阻性黄疸相关肌肉减少症的大鼠模型,探讨营养素和中药对其干预效果和作用机制。方法:1.纳入2019年12月至2020年12月我院肝胆外科住院的黄疸患者104例。按照 2019 年亚洲肌少症工作组(Asian working group for sarcopenia,AWGS)诊断标准将其分为肌少症(SA)组32例和非