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小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)感染小反刍动物而引起的一种急性传染病,临床表现为发热、口炎、腹泻和肺炎等特征,发病过程以高发病率和高死亡率为特征。我国西藏阿里地区于2007年首次暴发,近两年,新疆、内蒙古自治区、辽宁、山东、湖南、安徽、广西、云南、贵州等地相继发生疫情,小反刍兽疫防控任务十分严峻,有效防控小反刍兽疫的相关生物制品的研发势在必行。但截至目前,PPRV的致病机制还有待于进一步研究。因此,建立PPRV的反向遗传学技术操作平台就显得十分重要。国内外学者为深入了解本病的发病机理,为新型载体疫苗的研制提供基础,开展了PPRV感染性克隆的相关研究工作。本研究结合当前副黏病毒科病毒感染性克隆和麻疹病毒感染性克隆的研究方法的基础上,通过对pBluescript?II KS(+)载体和pVAX1载体的改造,获得可作为通用型负链不分节段RNA病毒的反向遗传载体,pBKS-HDV载体和pVAX1-HDV载体。在pBKS-HDV载体基础上构建了基于T7 RNA聚合酶启动子的含病毒基因组全长cDNA的质粒pBKS-PPRV Nigeria 75/1,在pVAX1-HDV载体基础上构建了基于CMV启动子的含病毒基因组全长cDNA的质粒pVAX1-PPRV Nigeria 75/1。以病毒全长cDNA为基础获得了辅助性质粒PCI-N、PCI-P和PCI-L。为能成功拯救PPRV全长cDNA,以EGFP报告基因为基础构建了微基因组pKS-LGT、pKS-HAM-TGL、PTVT-LGT和PTVT-HAM-TGL。通过将微基因组与辅助性质粒共转染的方式摸索病毒拯救的条件,依此来验证辅助性质粒的有效性,极大提高了全长病毒的拯救成功率。本研究成功克隆出山羊SLAM基因,通过对遗传抗性的筛选,成功构建稳定表达山羊SLAM受体的细胞系,为利用RNA聚合酶II拯救系统拯救PPRV病毒奠定了基础。为深入了解H蛋白与PPRV病毒致病性的关系,通过生物信息学的方法建立了PPRV Nigeria75/1克隆株、PPRV Nigeria 75/1疫苗株和Tibet 07株H蛋白与人、犬、山羊SLAM受体相互作用Cartoon图,利用Cartoon图的结果分析了相互作用的位点以及相互作用位点的差异性。为进一步验证分析结果的准确性,构建了PPRV Nigeria 75/1克隆株和Tibet 07株H蛋白胞外区全长表达质粒、胞外区分段表达质粒和山羊SLAM胞外区表达质粒,经Co-IP实验证实PPRV Nigeria 75/1克隆株H蛋白可以与山羊SLAM受体发生相互作用。开展PPRV Nigeria 75/1克隆株和Tibet 07株H蛋白与山羊SLAM受体相互作用的研究,为进一步了解PPRV Nigeria 75/1克隆株和Tibet 07株H蛋白与SLAM受体结合后对病毒致病性的影响机制,需在精确定位H蛋白与山羊SLAM受体相互作用位点的基础上借助PPRV感染性克隆平台进行研究。