【摘 要】
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由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-Co V-2)引起的冠状病毒肺炎疫情(COVID-19)导致了全球经济和健康受到前所未有的冲击。由于RNA病毒的高突变速率,对抗体药物开发提出了新的挑战。考虑到新冠病毒首先引起的呼吸道感染以及生产成本、药物生物利用度、给药方式等情况,纳米抗体VHH具有尺寸小、研发速度快、可吸入给药、易于构建多价体防止免疫逃逸的优势,是新抗体研发的热点之一。但作为蛋白质药物
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由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-Co V-2)引起的冠状病毒肺炎疫情(COVID-19)导致了全球经济和健康受到前所未有的冲击。由于RNA病毒的高突变速率,对抗体药物开发提出了新的挑战。考虑到新冠病毒首先引起的呼吸道感染以及生产成本、药物生物利用度、给药方式等情况,纳米抗体VHH具有尺寸小、研发速度快、可吸入给药、易于构建多价体防止免疫逃逸的优势,是新抗体研发的热点之一。但作为蛋白质药物种类之一,纳米抗体不可避免的面临着稳定性及半衰期等急需解决的问题。在本研究中,我们设计了两段多肽序列分别连接到两种靶向病毒RBD的纳米抗体VHH72及Nb21的末端,探究其对纳米抗体功能的影响。其中一段多肽设计为SARS-Cov-2 S蛋白上独特的宿主蛋白酶水解位点序列PS,以期竞争性抑制S蛋白酶解从而阻断病毒入侵的两个环节。另一段则是上述序列重排所生成的一段等分子量无意义多肽NC,用作对照。然后利用大肠杆菌系统表达纯化了四种抗体-多肽蛋白,即VHH72-PS,VHH72-NC,Nb21-PS,Nb21-NC。为了检测上述抗体-多肽蛋白的病毒中和能力,利用慢病毒构建了过表达ACE2的HEK293T细胞系作为靶细胞并包装了表面带有S蛋白的假病毒。结果发现:1.在中和能力高的Nb21纳米抗体后添加PS或NC均未显著改变其中和能力,Nb21-NC的EC50略小于Nb21-PS。2.在无中和能力的单价VHH72末端添加多肽可使其获得中和能力,VHH72-NC的EC50小于VHH72-PS的,表明NC序列的提高效果更为显著。
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