【摘 要】
：
目的:SIX1在多种肿瘤中均有表达,且其表达量与肿瘤分级或其恶性程度呈正相关。纳米抗体具有免疫原性小、分子量小、易于制备、稳定性高等优点。本课题靶向SIX1从酵母表面展示纳米抗体文库筛选纳米抗体,并初步测定了一种靶向SIX1的多肽的体外活性。方法:首先原核表达及纯化SIX1蛋白,将其用作抗原进行了磁珠分选:用FITC/PE分别标记SIX1蛋白后与酵母展示纳米抗体文库共孵育,加入FITC/PE抗体包
论文部分内容阅读
目的:SIX1在多种肿瘤中均有表达,且其表达量与肿瘤分级或其恶性程度呈正相关。纳米抗体具有免疫原性小、分子量小、易于制备、稳定性高等优点。本课题靶向SIX1从酵母表面展示纳米抗体文库筛选纳米抗体,并初步测定了一种靶向SIX1的多肽的体外活性。方法:首先原核表达及纯化SIX1蛋白,将其用作抗原进行了磁珠分选:用FITC/PE分别标记SIX1蛋白后与酵母展示纳米抗体文库共孵育,加入FITC/PE抗体包被的磁珠进行富集,利用全自动免疫磁珠细胞分选仪分选出阳性细胞,FITC及PE先后各筛选两轮,共计4轮,收集阳性细胞并利用流式细胞术分析阳性率。利用流式分选对所获阳性克隆进一步富集。为检测假阳性克隆的比率,设置了酵母未经诱导表达纳米抗体的阴性对照组并全程平行操作,对该组所获单克隆提取质粒进行测序。用CCK法检测了靶向SIX1多肽PDP2对小鼠胰腺癌细胞系pan02增殖的影响。结果:2轮FITC磁珠分选阳性率达13.38%,随后2轮PE的阳性率增至34.6%,表明磁珠分选有效富集了阳性克隆,其中FITC的第一或第二轮阳性率近似,提示第二轮并未进一步富集,但PE的第二轮（34.6%）与第一轮（7.19%）相比显著提高了阳性率,表明二轮富集是必要的。流式细胞分选后,共收集1440个双阳性单克隆。未诱导表达的阴性对照组也获得了克隆,提示假阳性的存在。此外发现多肽PDP2在50,100和150μM均显著抑制细胞增殖。结论:组合磁珠及流式分选可成功获得靶向SIX1的多个克隆,对阳性率的监控表明每种标签应至少筛选两轮,阴性对照组表明存在假阳性,应对所获单克隆进一步筛选验证。另外靶向SIX1多肽PDP2可显著抑制小鼠胰腺癌细胞增殖。
其他文献
通过研究荒漠生态系统典型群落样地对近地层风沙活动的影响,揭示荒漠生态系统中不同植被类型的防风阻沙效果。在乌兰布和沙漠东北缘荒漠—绿洲过渡带选择油蒿（Artemisia ordosica）、霸王（Sarcozygium xanthoxylon）、梭梭（Haloxylon ammodendron）和四合木（Tetraena mongolica）4种典型植物群落,并以裸沙丘作为对照样地（CK）在不同季节
固有无序蛋白是一类没有稳定三级结构却具有生物学功能的蛋白质,随着各种测序技术的不断发展,越来越多的固有无序蛋白被发现并且收录到相关的数据库中。据统计,真核生物中大约有30%的蛋白质都含有无序区域。研究表明,无序区域与固有无序蛋白的许多生物学功能有关。因此,固有无序蛋白与固有无序蛋白的无序区域成为近年来的研究热点。生物学上认为蛋白质的序列决定蛋白质的结构,蛋白质的结构决定蛋白质的功能。由于蛋白质序列
目的：通过系统评价高血压中医证候学特征，为高血压的中医辨证及治疗方案的制定及优化提供参考。方法：检索国家知识基础设施数据库（CNKI）、中国学术期刊数据库（CSPD）、中文科技期刊数据库（CCD）及中国生物医学文献数据库（CBM）,筛查参考文献，纳入高血压患者中医证候学的临床研究，研究类型为横断面研究。采用美国卫生保健质量和研究机构（AHRQ）评价工具和Stata 12分析软件进行质量评价和单组变
当前畜牧业发展迅速,优质蛋白质饲料严重短缺,灌木、半灌木对扩大饲料资源具有十分重要的意义,库布齐地区灌木资源丰富,蛋白质含量较高,发展灌木、半灌木青贮饲料不仅解决灌木资源平茬浪费问题,而且通过合理平茬刈割既能够促进灌木植物的生长,刈割后进行揉丝加工青贮又能扩大饲料原材料来源,本文以沙柳（Salix psammophila）、柠条（Caragana korshinskii）、花棒（Hedysarum
研究表明,许多神经退行性疾病,如帕金森病和阿尔茨海默病等,都与亚高尔基体蛋白质的定位有关。因此,正确识别高尔基体驻留蛋白的类型对了解高尔基体驻留蛋白的功能有着非常重要的作用。载脂蛋白参与胆固醇的代谢、膜的重塑和神经元的凋亡,在维持脂质代谢平衡、胆固醇重新分布和磷脂膜修复中起重要作用,载脂蛋白的异常表达与心血管疾病、阿尔茨海默病、癌症等疾病有关系,因此,正确识别载脂蛋白的种类有助于人们对心血管疾病、
鼠李糖（L-Rhamanose）又名6-脱氧-L-甘露糖,广泛存在于植物的多糖、糖苷、植物果胶和细菌多糖中,是很多细菌,植物,真菌细胞壁的重要组成成分。随着鼠李糖苷类化合物的生物医药活性和药理作用机制的不断阐明,鼠李糖苷类化合物越来越受到重视。而UDP-鼠李糖作为合成鼠李糖苷的直接糖基供体,参与各种鼠李糖苷的形成,在鼠李糖苷的合成中十分重要。UDP-鼠李糖是在糖基转移酶的催化下与类黄酮、萜类等次生
肾脏是机体内重要的代谢器官,不仅可以清除体内的代谢产物,而且还有内分泌功能,能够分泌激素参与生理功能的调节。根据已有的禁水、盐胁迫两种处理获得的转录组数据显示,肾脏在抗氧化调节中有抗氧化基因上调表达的趋势和存在非编码RNA参与的调节作用。本实验在细胞水平验证转录组数据揭示的抗氧化基因参与的抗氧化作用。首先将双峰驼的肾皮质和肾髓质细胞进行体外培养,之后对细胞进行高糖和高温的逆境模拟培养,最后对逆境培
酸催化剂在工业生产中扮演着不可或缺的角色。为避免传统均相酸催化剂腐蚀设备、产生大量废水、与产物分离困难和污染环境等缺点,非均相催化剂开始盛行。近年来炭基固体酸催化剂由于价格低廉、无污染、原料来源广泛等特性而受到研究者广泛关注。本实验利用内蒙古地区资源优势,以锡林郭勒胜利煤矿的褐煤为原料,通过一步炭化磺化法、热解炭化磺化法和改变不同热解气氛制备煤基固体酸催化剂,并用于油酸和甲醇催化酯化制备生物柴油,
数据包络分析（Data Envelopment analysis,DEA）是对多输入多输出决策单元进行相对效率评价的一种非参数方法,经过40多年的发展,现已成为经济学、管理学和系统科学领域的重要分析工具之一。传统DEA方法只能相对于决策单元集,而不能相对于任意指定的参考系对决策单元进行评价。广义DEA方法提出了样本单元的概念,有效地解决了这个问题,拓展了传统DEA方法的理论体系。本论文主要在广义D
蒸散量的精准测算是提高植物水分利用率的关键,对我国农业技术的发展起着至关重要的作用。本研究以内蒙古乌海市为研究对象,基于2019-2020年间的Landsat 8卫星影像数据,通过SEBAL模型反演该地区生长季日蒸散量,并使用SPSS软件分析不同气象因子的时空变化规律及其对蒸散量的影响。结果表明:（1）基于Landsat 8遥感影像数据,利用SEBAL模型反演的地表蒸散发量取得较好的反演精度。（2