GⅡ-4型诺如病毒P粒子的表达及其与组织血型抗原结合的初步研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lichlei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:克隆诺如病毒(NVs)GⅡ-4型1991年至今五个不同年代变异株的P区基因,并表达、纯化其蛋白,即P粒子;通过分析不同P粒子与其受体——人组织血型相关抗原(HBGAs)之间的结合模式,以确定GⅡ-4诺如病毒感染的宿主范围,为防治GⅡ-4诺如病毒的感染提供科学数据。方法:选取五株不同年代GⅡ-4型诺如病毒变异株,分别克隆其ORF2区,以此为基础扩增P区并与PGEM-Teasy载体相连,得到重组质粒PGEM-Teasy-P。之后用BamH I和Not I双酶切将P区基因切下连接至PGEX-4T-1表达载体,得到PGEX-4T1-P表达质粒。利用GST原核表达系统经IPTG诱导、超声破碎细胞后表达P蛋白(此时带有GST蛋白标签)。利用琼脂糖凝胶4B对P蛋白进行纯化并用thrombin凝血酶去除GST标签以形成二十四聚体的P粒子。利用制备成功的P粒子、实验室现有的GⅡ-4型诺如病毒免疫家兔的血清,及从深圳收集的117份唾液标本,用酶免疫分析试验(EIA)测定五株变异株的P粒子与受体组织血型相关抗原(HBGAs)之间的结合模式。结果:1.成功构建了五株GⅡ-4型诺如病毒的PGEX-4T1-P表达质粒。2.制备了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株的P粒子,大小为38KDa。3.测定了五株GⅡ-4型诺如病毒变异株P粒子与受体HBGAs之间的结合模式,Camberwell株、95/96US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型(O+)唾液结合,与O型非分泌型(O-)不结合,Hunter株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结合。结论:HBGAs与GⅡ-4型诺如病毒P粒子的结合呈现毒株特异性结合,Camberwell株、95/96US株和2006b株与A型、B型、O型分泌型(O+)唾液结合,与O型非分泌型(O-)不结合,Hunter株和Sakai株与A型、B型、O+型、O-型唾液均不结合。
其他文献
小学教师对小学生学习习惯的养成负有不可推卸的责任。一、教师的欣赏是小学生学习的外在动力学生“近乎天然”的“向师”心理使教师的思想品质层面和行为层面成为了学生关注
建设开放且有活力的语文课堂是语文课程的四大理念之一,它是语文教学迈向新课程的需要,也是点燃学生创新火花的载体。开放性教学要创设质疑问难的情境,打开思维的空间,挖掘教
教学质量是学校的生命,是教育的血液,它决定着学校的生存和教育的发展。因此,提高教学质量,是学校探究工作的重点和中心,也是学校教育工作永恒的主题、主旨和主线。教育教学
“三生教育”就是要通过教育的力量,使受教育者树立正确的生命观、生存观、生活观的主体认知和行为过程。即通过整合学校教育、家庭教育、社会教育的力量,激发学生的主体认知
现代教育的特征是充分展现人的主体性,追求人的全面发展。因此,在小学数学课堂教学中应以学生全面、主动、和谐地发展为中心。这就要求教师合理运用学习策略,最大限度地调动