背景华蟾素注射液为中华大蟾蜍皮的水溶性制剂,具清热解毒,化瘀散结,利水消肿等功效,临床广泛应用于多种恶性肿瘤。华蟾素注射液单独使用时,对中晚期肝癌,胃癌,食管癌疗效颇佳,可抑有效制肿瘤细胞生长,提高患者生存质量,且副作用小；联合用药时,华蟾素注射液可在一定程度上起到增效减毒作用。其主要活性物质为：一、吲哚生物碱类成分,包括蟾蜍色胺,脱羟基蟾蜍色胺,蟾蜍噻咛,脱氢蟾蜍噻咛等；二、乙型强心苷类成分,包括蟾毒灵,蟾毒他灵,华蟾毒精,远华蟾毒精等,该类成分生物活性主要体现在抗肿瘤方面；三、多肽类成分,是一类分子量分布范围为700Da到5000Da的混合多肽；四、核酸类成分,包括腺嘌呤,鸟嘌呤,胸腺嘧啶,尿嘧啶等。华蟾素注射液中亲脂性成分研究较少,抗肿瘤活性物质研究不明确,其代谢产物的相关研究也少有报道。基于此,本研究对华蟾素注射液中亲脂性化学成分展开了系统的分离并开展了初步的体外药效筛选,同时,对于含量较高的8种蟾毒配基类成分进行了代谢产物分析研究,旨在更好的阐释华蟾素注射液抗肿瘤的药效物质基础。目的1系统分离华蟾素注射液中亲脂性成分并鉴定化合物结构,阐明华蟾素注射液抗肿瘤物质基础。2针对分离得到的蟾毒配基类化合物,进行体外抗肿瘤活性筛选,阐明蟾毒配基类成分结构特点和抗肿瘤活性之间的构效关系。3针对分离得到的八种蟾毒配基类化合物,进行体外动物肝微粒体代谢实验,初步阐明蟾毒配基类化合物和代谢产物之间的代谢规律及不同种属间的药物代谢差异。方法1运用硅胶,C18反相硅胶,葡聚糖凝胶LH-20,制备色谱等现代色谱技术对主要成分进行分离,并通过高分辨质谱及核磁共振数据进行化合物结构鉴定。2通过已知化合物质谱裂解规律分析,运用HPLC-Solarix FT-ICR-MS在线分析和文献对比,推导亲脂性部位的化学成分。3以三种肿瘤细胞为研究对象,通过MTT比色法检测样品体外抗肿瘤活性,比较分析蟾毒配基类成分因结构差异而导致的抗肿瘤活性的不同。4运用体外肝微粒体孵育法,使用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS对主要蟾毒配基类成分进行体外代谢学的研究,阐明该类化合物可能的体外代谢途径。结果1从华蟾素注射液中提取分离并鉴定得到21个主要化合物,并鉴定了其中18个化合物的结构。2通过10种蟾毒配基类化合物体外抗肿瘤活性试验,发现C14-C15位形成氧环的时候,化合物即活性下降；乙酰基取代,其活性受C14-C15环氧取代而不同；羟基取代在含氧环的结构中影响比较明显；结构中羰基取代,抗肿瘤活性增加。3采用液相高分辨质谱连用法推导鉴定了其中33个化合物,基本阐明了华蟾素注射液中的亲脂性成分。4对华蟾素中含量较高的八种蟾毒配基类化合物进行了体外肝微粒代谢反应,初步比较了不同化合物的代谢差异及其在不同种属间的代谢差异。结论1基本阐明华蟾素注射液中的亲脂性化学成分及对肿瘤细胞的构效关系进行了初步探讨。2基本阐明华蟾素中蟾毒配基类成分的肝微粒体代谢途径,及种属间的代谢差异性。