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猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Productive and Respiratory Syndrome，PRRS）是危害世界养猪业的主要传染病之一，造成了巨大的经济损失。其病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Productive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)，归属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属。但由于PRRSV拥有严格的宿主细胞特异性、抗体依赖性增强作用、广泛的毒株变异现象和持续性感染等特性而使针对该病的免疫预防没有得到任何实质性突破。
本研究旨在(1)探明浙江地区PRRSV Nsp2基因的分子变异特征;(2)制备Nsp2、GP5和N蛋白的单克隆抗体;(3)建立PRRSV N蛋白的Bac-to-Bac杆状病毒表达系统。
1.应用RT-PCR方法对2008-2009年采集于浙江省部分发病猪场的41份疑似PRRS病猪的脾、肺及淋巴结混合组织样本进行PRRSV Nsp2基因序列分析。结果显示，41份PRRSV分离毒株中有20份Nsp2部分缺失，与国内分离毒株JXA1、HuN、HUN4等具有相同的缺失特征。41个分离株间同源性高达89.2％～100％，其中20个缺失株间的核苷酸同源性为94.2％～99.8％;21个非缺失株间的核苷酸同源性为99.2％～100％。
2.将原核表达的重组Nsp2、GP5和N蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠，取脾细胞和骨髓瘤细胞融合，ELISA和IFA鉴定阳性后有限稀释法筛选单克隆，获得4株抗Nsp2、1株抗GP5和1株抗N蛋白的特异性单抗，命名为Nsp2:1A5、1D8、1F1和3H7，GP5:4A3，N:5E10。4株抗Nsp2和1株抗N蛋白的单抗均能通过ELISA、IFA和Western blot方法鉴定，测定ELISA效价为(Nsp2:1∶20000;N:1∶1000)，说明识别抗原线性表位;1株抗GP5单抗并不能通过ELISA和Western blot方法鉴定，其IFA效价为1∶500，说明识别抗原构象表位。
3.RT-PCR方法扩增PRRSV JX株N蛋白基因，将其克隆于质粒pFastBacTMHTA中，构建的重组供体质粒pFastBacTM HT A-N转化于DH10Bac感受态细胞中发生转座，得到的重组转座子reBacmid-N转染至昆虫细胞sf9中，并进行重组杆状病毒的包装。通过SDS-PAGE、Western-blot和IFA试验对所表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。结果显示，经Bac-to-Bac杆状病毒系统表达的重组N蛋白能与鼠源抗N蛋白单克隆抗体反应，其相对分子质量约为15 kDa。
上述研究结果为建立PRRSV的免疫学诊断技术奠定了良好的基础。