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目的：食管癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。在我国河北的南部地区，食管鳞癌的发生率是世界最高的，为199/100,000。虽然外科手术以及术后放疗、化疗是治疗食管癌的有效手段，但术后5年生存率也只能达到30%左右。因此有必要寻求新的预防和治疗食管癌的有效方法。最近流行病学调查和实验研究证实非甾体类抗炎药（nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）如aspirin和NS-398等具有化学预防和治疗食管癌的作用。但关于NSAIDs具体的抗癌机制尚未完全阐明。目前认为NSAIDs主要通过抑制环氧合酶（cyclooxygenases，COXs）及前列腺素（prostaglandins，PGs）发挥其药理学作用。COXs在体内以两种同工酶形式存在，即COX-1和COX-2。COX-1固有表达于多种正常哺乳动物组织细胞，主要参与细胞正常的生理功能；而COX-2 mRNA和蛋白在正常组织中无表达，但在包括食管癌在内的多种肿瘤中却有高表达。COX-2和PGs均在肿瘤发生、发展中起重要作用，并直接参与肿瘤细胞的增殖和凋亡。因此NSAIDs作为COX-2的抑制剂可能通过抑制COX-2活性和/或表达，进一步抑制PGs合成发挥抗肿瘤作用。一些研究证实在COX-2基因启动子区域含有能与细胞核因子κB（nuclear factor κ gene binding，NF-κB）相结合的特异的DNA序列，并且NF-κB可调节<WP=5>COX-2的表达。多种肿瘤细胞中均能检测到有高活性NF-κB存在，并且活化的NF-κB在肿瘤发展中起重要作用，如促进细胞转化、促进肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤细胞凋亡等。但在食管癌中是否有持续活化的NF-κB存在，以及NSAIDs是否可通过抑制NF-κB活性发挥抗食管癌作用均未见报道。本研究以体外培养人食管低分化鳞癌细胞株TE13细胞为研究对象；研究两种NSAIDs，非选择性的COX-2抑制剂aspirin和选择性的COX-2抑制剂NS-398，对TE13细胞NF-κB活性、COX-2表达、PGs合成、细胞增殖和凋亡的影响，以探讨其抗肿瘤机制。方法：体外培养人食管癌细胞株TE13细胞，然后用不同剂量的aspirin和NS-398处理细胞一定时间。细胞增殖用MTT还原法检测，细胞调亡用透射电镜和流式细胞学（flow cytometry，FCM）检测。用反转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）检测COX-2 mRNA表达，Western blot检测COX-2蛋白表达。放射免疫测定（Radioimmunoassay，RIA）检测PGF1α合成。用电泳迁移率改变分析（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）检测细胞NF-κB活性，Western blot检测细胞胞浆IκB蛋白水平。COX-2 mRNA表达水平，COX-2蛋白表达水平，IκB蛋白水平用Gel-Pro凝胶分析软件进行半定量分析。所有数据均用±s表示，用SPSS统计分析软件进行统计学分析，各组均数的比较行单因素方差分析（ANOVA），用最小显著差法（least significant difference, LSD）作两两比较，P<0.05为有显著性差异。结果：<WP=6>1 NSAIDs对食管癌TE13细胞增殖及凋亡的影响1.1 aspirin 和NS-398抑制TE13细胞增殖MTT还原法检测显示aspirin 和NS-398处理TE13细胞72 h后均可剂量依赖性地抑制TE13细胞增殖。对照组的增殖率被看作为100%。在1，4，8 mmol/L浓度的aspirin作用下细胞的增殖率明显降低，分别为55.1593±19.1479%, 49.7030±10.9529%, 38.0840%±19.2731%（P<0.05）。在10-9，10-8，10-6，10-4 mol/L浓度的NS-398作用下细胞的增殖率降低，分别为50.2218±14.8091%, 35.5440±18.2149%, 15.7832%±4.9604%, 4.9432±3.5938%（P<0.05）。1.2 aspirin 和NS-398诱导TE13细胞凋亡1.2.1透射电镜下观察细胞具有凋亡的形态学变化 aspirin 和NS-398孵育TE13细胞72 h均可诱导TE13细胞凋亡。对照组细胞的形态学表现为：细胞核增大，畸形明显，可见大而明显的核仁，细胞核/细胞质比例失调，常染色质增多，异染色质减少。在4mmol/L的aspirin组可见细胞核固缩，异染色质边集在核膜下，并呈半月形改变。在10-6 mol/L的 NS-398组可见细胞核固缩，核碎裂发生。1.2.2 FCM检测细胞凋亡百分率（apoptosis percentage, AP） aspirin 和NS-398孵育TE13细胞24 h均可剂量依赖性地诱导TE13细胞发生凋亡。在1，4，8 mmol/L浓度下aspirin诱导的AP分别为13.7667±2.3180%, 13.9333±2.9143%, 14.6333±1.8502%，与对照组的4.5667±3.1786%相比较较具有显著性差异（P<0.05）。在10-9，10-8，10-6，10-4 mol/L浓度下NS-398诱导的AP分别为5.4000±1.0817%, 6.0000±0.7810%, 11.3000±0.2646%, 17.4667±<WP=7>2.3861%，与对照组的2.6333±1.5695%相比较具有显著性差异（P<0.05）。2 NSAIDs对食管癌TE13细胞COX-2表达及PGs合成的影响2.1 aspirin 和NS-398抑制TE13细胞COX-2 mRNA表达 RT-PCR结果显示TE13细胞中有一定的COX-2 mRNA表达，并且aspirin 和NS-398孵育细胞24 h均可剂量依赖性地抑制TE13细胞COX-2 mRNA表达（P<0.05）。在1，4，8 mmol/L浓度下aspirin的抑制率分别为19.14%，31.12%，43.04%（P<0.05）。在10-9，10-8，10-6，10-4 mol/L浓度下NS-398的抑制率分别30.65%，31.81%，46.39%，82.33%（P<0.05）。2.2 aspirin 和NS-398抑制TE13细胞COX-2蛋白表达Western