【摘 要】
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宽体金线蛭Whitmania pigra是中药材水蛭HIRUDO的基原动物之一,具有抗凝、降栓等功效,临床疗效显著。随着药材水蛭需求量不断增加,野生资源量逐年下降,人工养殖水蛭是必然趋势。然而,随着其人工养殖规模和密度不断扩大,水蛭疾病问题突显,“红肿病”尤为突出,已成为人工养殖水蛭产业发展的瓶颈。本实验以患“红肿病”宽体金线蛭为研究对象,查找引起宽体金线蛭患病的主要病原菌,并探究其生物学特性、耐
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宽体金线蛭Whitmania pigra是中药材水蛭HIRUDO的基原动物之一,具有抗凝、降栓等功效,临床疗效显著。随着药材水蛭需求量不断增加,野生资源量逐年下降,人工养殖水蛭是必然趋势。然而,随着其人工养殖规模和密度不断扩大,水蛭疾病问题突显,“红肿病”尤为突出,已成为人工养殖水蛭产业发展的瓶颈。本实验以患“红肿病”宽体金线蛭为研究对象,查找引起宽体金线蛭患病的主要病原菌,并探究其生物学特性、耐药基因及致病机理,以期为宽体金线蛭细菌性疾病的防控提供科学依据。首先,从患“红肿病”宽体金线蛭病灶处分离致病菌,经科赫法则回染验证所分离菌株是否具致病性,最终筛选出一株致病性最强的菌株,经16S r DNA鉴定为气单胞菌属菌株,对该菌株进行全基因组测序并进行ANI分析鉴定并命名为异常嗜糖气单胞Aeromonas allosaccharophila-WP204;分析全基因组数据,发现该菌株携带毒力因子和耐药基因,推测毒力因子的存在是病原菌具备致病性的关键。其次,为探究异常嗜糖气单胞菌WP204菌株的生物学特性,通过不同温度、盐度、p H筛选该菌的适宜生长条件,其适宜生长环境为:温度18.0-38.0℃,p H5.0-9.0,盐度0.0-3.0%;产酶实验表明,该菌株具产蛋白酶、淀粉酶能力和α-溶血性等特性。通过生理生化鉴定,该菌株可利用多种糖类,发酵葡萄糖产酸等特性,与气单胞菌属菌株的生化特性具较高一致性。药敏试验表明,该菌株对多数喹诺酮类、氨基糖苷类抗生素敏感,而对β-内酰胺类抗生素具明显耐药性。以上生物学特性研究可为宽体金线蛭“红肿病”细菌性疾病的防治提供参考。最后,采用不同浓度病原菌菌悬液浸染宽体金线蛭,计算LD50为3.65×10~5CFU/m L。该菌株感染宽体金线蛭后,体表出现明显红肿、吸盘无力、游动减少等病症;组织切片发现肠道和肌肉组织细胞膜无明显界限,细胞核溶解等现象。感染该菌株后肠道和肌肉组织SOD、CAT、AKP酶活均明显降低,表明细菌感染激活机体的抗氧化应激系统以维持体内自由基等离子的平衡。肠道中SOD、CAT表达量先升后降,肌肉中呈先降后升高,而肠道中AKP表达量先降后升,肌肉中呈先升后降趋势,表明异常嗜糖气单胞菌WP204感染刺激宽体金线蛭免疫相关酶活的表达。综合以上分析以及异常嗜糖气单胞菌的一般致病特点,初步判断异常嗜糖气单胞菌WP204为宽体金线蛭“红肿病”的主要致病菌,以上研究结果将为水蛭相关细菌性疾病的致病机制及其防治提供参考。
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