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在中分化胃癌细胞SGC-7901中,SonicHedgehog(Shh)和Wnt信号通路处于激活状态,Gli1和β-catenin分别为这两条信号通路的核转录因子,对SGC-7901细胞的作用机制还不明确。姜黄素具有抗肿瘤效应,但姜黄素能否通过下调细胞中Gli1和β-catenin两者分子发挥抗肿瘤作用目前并不清楚。目的探究姜黄素是否能作用于Gli1和β-catenin这两者分子,从而影响胃癌细胞SGC-7901的迁移侵袭能力、细胞骨架重构和上皮间质转化过程(Epithelial mesenchymal transformation,EMT),引起细胞凋亡和细胞周期的改变;SGC-7901细胞中Gli1和β-catenin是否存在相互作用以及姜黄素对这种相互作用的影响。实验方法1.运用CCK-8实验观察姜黄素对SGC-7901细胞增殖能力的影响,确定姜黄素的实验浓度。2.使用小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)对SGC-7901细胞进行转染实验,运用Western blotting和qPCR验证两段siRNA是否能分别从蛋白水平和mRNA水平成功下调SGC-7901细胞中Gli1和β-catenin表达,从而阻断Shh和Wnt信号通路。3.运用Transwell实验、间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence,IF)和流式细胞术(Flow cytometry,FCM),验证分别下调SGC-7901细胞中Gli1和β-catenin联合姜黄素刺激对细胞迁移侵袭能力、细胞骨架变化以及细胞凋亡、周期的影响。4.下调SGC-7901细胞中Shh信号通路的Gli1分子或Wnt信号通路的β-catenin分子及使用姜黄素刺激,运用Western blotting检测EMT进程中相关分子Vimentin、E-cadherin的变化情况。5.运用免疫共沉淀实验技术(Co-immunoprecipitation,Co-IP)、Western blotting和qPCR,证明Gli1和β-catenin在SGC-7901细胞中是否存在相关性以及这种作用是否能被姜黄素抑制。实验结果:1.分别干扰Shh和Wnt信号通路,使得SGC-7901细胞的迁移侵袭能力下降,细胞骨架发生重塑;抑制了SGC-7901细胞的EMT进程;促使SGC-7901细胞周期分别阻滞于G0/G1和S期。2.SGC-7901细胞中Gli1和β-catenin分子在蛋白水平存在相互作用,且这种相互作用能被姜黄素所抑制。3.姜黄素通过调控Gli1和β-catenin抑制SGC-7901细胞的迁移侵袭能力和EMT进程,引起细胞骨架重塑,促进细胞凋亡和周期阻滞。结论:姜黄素可以通过调控Gli1和β-catenin进而抑制胃癌细胞SGC-7901迁移侵袭、细胞骨架重构和EMT进程;促使细胞发生凋亡、周期阻滞。为进一步探究胃癌的分子机制及临床精准治疗提供新思路。