【摘 要】
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山羊是建立乳腺生物反应器的良好材料。近年来在转基因山羊研究方面取得了一定的进展。西农萨能奶山羊是在原种瑞士萨能奶山羊的基础上,经过五十多年精心选育而形成的我国优
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山羊是建立乳腺生物反应器的良好材料。近年来在转基因山羊研究方面取得了一定的进展。西农萨能奶山羊是在原种瑞士萨能奶山羊的基础上,经过五十多年精心选育而形成的我国优良奶山羊品种,具有个体大,产奶量高,适应性广,抗病性强的优良性状。构建其基因组文库,克隆及应用其优良基因对科学研究和生产都具有极大的价值 。本实验应用lambda 噬菌体构建了西农萨能奶山羊基因组文库为筛选山羊乳蛋白全基因,构建山羊乳蛋白基因定点整合的转基因敲入载体奠定基础。其结果如下: 1、采用Sucrose 抽提缓冲液裂解血细胞,蛋白酶K 消化,酚氯仿抽提的方法提取山羊全血DNA,得到了高纯度的DNA。经测定,OD260/ OD280=1.81。琼脂糖凝胶电泳显示大部分DNA片段大于100 kb。经Sau3A?部分酶切后,分级分离回收15-23 kb外源DNA片段。2、将外源DNA 片段插入Lambda BlueSTAR BamH? Arms。在连接反应中,载体与插入片段分子比例为1:3 时,得到较好的连接效果。 3、重组DNA 分子经Lambda 噬菌体包装蛋白混合物体外包装为Lambda 噬菌体颗粒,Lambda 噬菌体颗粒转染大肠杆菌ER1647,铺于加有X-gal的LB 平板上。计算文库滴度。包装效率达到3.4×10~6 pfu/μgDNA。4、将噬菌体颗粒转染大肠杆菌BM25.8,通过菌株表达的Cre 重组酶的自剪切作用获得连有基因组插入片段的pBlueSTAR-1 质粒。质粒经NotI 酶切鉴定插入片段大小。5、本实验共获得1.7×10~6 个有效克隆,插入片断长度在15-23 kb 范围,成功构建了西农萨能奶山羊基因组文库。
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