目的:观察抑制DOT1L基因的表达后,胃癌细胞系MGC-803增殖、迁移及侵袭能力的改变,并探讨其发生发展的可能机制。方法:(1)采用Western blot检测BGC-823、MGC-803、SGC-7901三种胃癌细胞系中DOT1L基因的表达水平,筛选出高表达DOT1L基因的胃癌细胞系。(2)根据DOT1L靶点设计合成sh RNA,构建p LKO.1 puro-DOT1L-sh RNA病毒载体并选取高表达DOT1L的胃癌细胞系进行病毒感染。(3)采用Real-time PCR法对各组细胞DOT1L m RNA的表达水平进行检测,m RNA低表达即代表病毒干扰成功。(4)采用CCK-8法检测基因干扰后对胃癌细胞增殖能力的改变,并通过细胞集落克隆实验,在显微镜下观察干扰基因表达后,各组细胞集落形成能力的变化。(5)利用Transwell实验和培养皿划痕损伤实验,显微镜下观察细胞侵袭和迁移能力的改变。(6)通过Western blot检测病毒干扰细胞DOT1L基因表达后,细胞中的上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin)的蛋白表达量。结果:(1)在、MGC-803、三种胃癌细胞系中呈现的表达水平有差异,其中在胃癌MGC-803细胞系中DOT1L基因的表达量要高于最高BGC-823,且略高于SGC-7901,因此本研究将针对MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移能力的改变进行后续实验。(2)成功构建sh RNA干扰DOT1L基因表达模型。(3)转染后DOT1L相关蛋白及m RNA的表达能力显著降低(P<0.05)。(4)胃癌MGC-803细胞系的沉默组在干扰DOT1L的正常表达后,较对照组的增殖及集落形成能力明显减弱(P<0.05);细胞的侵袭、迁移能力也明显减弱(P<0.05);细胞中N-Cadherin、Vimentin蛋白表达减少(P<0.05),E-Cadherin蛋白表达增加(P<0.05)结论:干扰DOT1L基因的正常表达对胃癌MGC-803细胞的增殖与集落形成能力有较为明显的抑制作用;并通过调控N-Cadherin、Vimentin及E-Cadherin的表达逆转EMT进程,进而减弱胃癌MGC-803细胞的迁移和侵袭能力。