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食源性疾病是世界性的公共卫生问题,食源性致病菌是引发食源性疾病的最主要因素。沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌是常见的食源性致病菌,其导致的食源性疾病已引起广泛重视。准确快速检测这些致病菌是预防和控制相关食源性疾病的关键。传统检测致病菌的方法时间长、操作复杂、工作量大,因此亟需建立一种快速、简单易用的现代化检测方法来检测食源性致病菌。而目前检测食源性致病菌都需要进行前增菌过程,但每种致病菌都有各自的生长习性和营养要求,不同的致病菌需要用不同的增菌培养基,这在很大程度上限制在实际检测中的应用,因此亟需研制一种能使它们等速快速增殖的通用增菌培养基。本研究第一部分以沙门氏菌为目标菌,建立了基于生物膜干涉(BLI)技术的快速检测方法,实现了食品中沙门氏菌的快速、准确检测,为我国食源性致病菌的监测体系提供了新的技术手段。第二部分研制了一种能使沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌等速快速增殖的通用增菌培养基,为后续利用多通道生物分子相互作用仪高通量检测技术检测上述三种致病菌打下了基础。主要研究内容如下:(1)建立了一种基于BLI技术的肠炎沙门氏菌实时无标记快速检测方法。抗体固定化时醋酸-醋酸钠缓冲溶液的最佳pH为5,抗体最佳固化浓度为50μg/mL。在缓冲溶液当中,结合时间在60 s、120 s、180 s和300 s时,肠炎沙门氏菌检出限分别为1.90×10~6 CFU/mL、1.29×10~6 CFU/mL、8.77×10~5 CFU/mL5.64×10~5 CFU/mL。此外,该方法特异性强。肠炎沙门氏菌在复合基质(全蛋粉和牛肉)检测中总体来看,不同时刻的回收率大多数都在95%以上,相对标准偏差均低于7.71%。我们认为这种基于BLI技术的方法有望成为食品安全领域和其他相关领域快速、无标签、特异、实时检测肠炎沙门氏菌的一种新型诊断工具。本研究开发的方法可方便地应用于其它食源性致病菌和有害物质的快速检测。(2)制备了一种能使沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌等速快速增殖的通用增菌培养基。经过单因素试验挑选出最佳的促进剂和抑制剂,并采用正交试验进行优化,最后得到沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌共增菌培养基(SSL)配方:胰蛋白胨17.0 g/L、蛋白胨3.0 g/L、酵母浸膏6.0 g/L、磷酸氢二钾2.5 g/L、磷酸氢二钠9.6 g/L、磷酸二氢钾1.35 g/L,?蛋白胨15.0 g/L、牛肉粉20.0 g/L、大豆蛋白胨10.0 g/L、放线菌酮0.3 g/L、甘露醇3.5 g/L、丙酮酸钠4.5 g/L、磷霉素钠1.15 mg/L、氯化锂1.00 g/L。(3)通过对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌复合增菌培养基的增菌效果分析,上述三种目标菌在SSL中培养12 h后菌浓度基本都能够达到10~7CFU/mL以上,培养16 h后菌浓度均可高达10~8 CFU/mL,高于接入胰蛋白胨大豆肉汤培养基培养24 h后的菌浓度,而非目标菌的生长受到抑制。增菌后的菌浓度完全能够满足后续多重PCR、多通道BLI生物传感器、多通道表面等离子体激元共振生物传感器等高通量检测技术的要求。