携载质粒/磷酸钙粒子的聚合物纤维作为血管组织工程支架的研究

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聚合物电纺纤维具有连续均一、疏松多孔、高比表面积的纳米结构,极好地模拟了细胞外基质,利于细胞的黏附和增殖。将携载生物活性大分子的电纺纤维作为组织工程支架,在为细胞增殖和迁移提供支撑的同时,可通过释放生物活性物质调控细胞功能、促进细胞外基质分泌以及加快组织再生。另一方面,血管化在组织工程中具有很大的挑战性,再生组织能否得到充分的营养供应,是成功构建完整的工程化组织的关键。据此,本论文研究了编码血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的质粒与磷酸钙(CaP)形成的复合纳米粒子,构建了携载上述复合粒子的电纺纤维,评价了其作为血管组织工程支架促进血管再生的效果。通过反相微乳液法制备了CaP/pDNA复合纳米粒子,粒径约在110nm, pDNA包裹效率在95%以上,结果表明CaP粒子对质粒的结构完整性有较好的保护作用,同时对质粒有较好的控释能力。细胞实验结果表明CaP/pDNA复合纳米粒子表现出较低的细.胞毒性、较高的转染效率,显示出CaP纳米粒子作为基因载体的优势。通过静电纺丝技术制备了载CaP/pDNA复合纳米粒子的纤维,纤维形貌规整,所携载的复合粒子均在纤维内部。体外释放结果表明,当加入10%分子量为2kDa的聚乙二醇时,CaP/pDNA纳米粒子可控制在4周内释放,以满足成熟血管生成的要求。将人脐带血管内皮细胞(HUVEC)和兔主动脉平滑肌细胞(SMC)分别接种到纤维膜上,考察了细胞的黏附和增殖、细胞的转染效率及细胞外基质的分泌,结果表明与浸润CaP/pDNA纳米粒子的纤维相比,包裹CaP/pDNA纳米粒子的纤维利于细胞的粘附,表达的细胞因子可促进细胞的增殖;同时能在28天内持续地转染细胞。将纤维支架植入大鼠皮下,结果表明,与浸润质粒的纤维支架相比,载复合粒子的纤维膜促进了CD31的表达、IV胶原和a肌动蛋白的分泌,促进了成熟血管的生成,植入4周时载质粒纤维支架诱导形成的血管数目是浸润组的近3倍,显示了携载质粒纤维膜作为血管组织工程支架的潜力。
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