慢病毒介导的YAP基因沉默对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

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目的:探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白(Yes-associatedprotein, YAP)对人肾癌786-0细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养肾癌786-0细胞,构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体并转染786-0细胞。RT-PCR和Western blot分别检测干扰786-0细胞前后YAP及其下游转录因子TEAD1mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8(cell counting kit-8)法检测沉默YAP后细胞增殖的改变;流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测细胞凋亡和周期的变化情况。结果:构建了3条针对YAP基因的YAP-shRNA慢病毒干扰载体和1条阴性对照慢病毒载体并成功转染786-0细胞;YAP-shRNA慢病毒干扰载体转染96小时后,可显著下调786-0细胞YAP mRNA及蛋白表达水平(P=0.000),并且TEAD1mRNA及蛋白表达水平也明显下降(P=0.000);与空白对照组和阴性对照组细胞相比,转染组细胞增殖明显抑制,细胞凋亡显著增加(P=0.000),细胞周期紊乱,G1期细胞明显增加,S期细胞明显降低(P=0.000)。结论: YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-0细胞中表达,进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。
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