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研究目的:
利用计算机虚拟筛选对PARP-1有潜在抑制作用的中药单体,研究对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)多聚ADP核糖聚合酶(Poly(ADP—ribose) polymerase-1,PARP-1)表达的抑制作用。初步探讨其作用机制,开发低毒、高效的天然药物,为治疗糖尿病神经病变、肿瘤等疾病提供实验依据。
研究方法:
在中国天然产物数据库(Chinese Natural Product Database,CNPD)中通过计算机虚拟筛选初步得到了对PARP有潜在抑制作用的34种中药单体,找到了6种,以ONOO—激活人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的PARP-1,western blot法检测其蛋白表达水平,同时观察药物的抑制作用。用MTT法进一步探讨对PARP-1有抑制作用的单体药物对细胞活性的影响。
研究结果:
1.ONOO—200 uM作用2小时,镜下观察细胞状态良好,3-AB10-4M对PARP-1的激活有明显的抑制作用。以ONOO—200 uM作用于HUVEC2小时作为筛选PARP-1的模型。
2.人参皂甙Re对PARP-1的表达有明显的抑制作用,且呈现出浓度依赖性。Rb1仅在10-4M对PARP-1有抑制作用。其余药物未观察到明显的抑制作用。
3.人参皂苷Re对H2O2引起的细胞损伤有保护效应,且呈现出浓度依赖性,而人参皂苷Rb1对H2O2引起的HUVEC细胞损伤未观察到保护作用。
研究结论:
在HUVEC,人参皂甙Re对ONOO—激活的PARP-1的蛋白表达有抑制作用,对H2O2引起的细胞损伤具有保护作用,其效应呈现出剂量依赖性。