精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSC)是哺乳动物体内唯一可以将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。猪作为一种重要的模式动物,建立和完善猪精原干细胞(pSSC)的培养体系非常重要。已有的精原干细胞长期培养体系并不能完全实现猪精原干细胞的体外长期培养,因此我们需要优化pSSCs的体外培养体系,为探索其生物学特性奠定基础。我以2D赛天然人工合成多肽基质涂层作为一种胞外基质,对不同的化学小分子组合进行筛选,通过添加Chir99021,Repsox以及CD脂质浓缩物,将猪的精原干细胞体外培养至三个月,主要研究结果如下:1.通过筛选不同的细胞外基质后,使用2D赛天然作为细胞培养基质,在体外可将猪的精原干细胞培养至两个月,在培养过程中观察到两种不同的克隆形态。一种与典型的小鼠胚胎干细胞克隆类似,另一种为典型的葡萄串珠状精原干细胞簇,前者极有可能提供一种猪多能性干细胞获得的新方法;2通过筛选不同的化学小分子组合,最终确定Chir99021,Repsox以及CD脂质浓缩物可以使猪精原干细胞培养时间从两个月延长至三个月,并维持较好精原干细胞特性;3 pSSCs异种移植到无精症小鼠的睾丸中,可在不育小鼠生精小管中增殖以及自我更新,维持其未分化状态,但不能进一步向下游发生减数分裂。本研究将猪的精原干细胞体外培养至三个月,将一些提高多能性的化学物质应用于猪的精原干细胞的长期培养,并探索了猪精原干细胞异种移植曲细精管后的潜在分化潜能,为进一步研究猪精原干细胞特性奠定了基础。此外,研究中的类小鼠胚胎干细胞样克隆很有可能作为一种猪多能干细胞新的来源,为猪的多能干细胞研究提供了重要借鉴。