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目的： 本实验在前期研究的基础上，在体外模拟血管外壁组织结构，利用外膜成纤维细胞（AFB）和平滑肌细胞（SMC）在微孔多聚碳酸酯膜（Polyethylene terephalate，PET膜）上共培养，对血管外壁的缝隙连接信息通道进行研究；模拟体内自发性蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）环境，从外膜层加入不能透过PET膜的氧合血红蛋白（oxygenated hemoglobin，OxyHb），观察共培养体系中未接触氧合血红蛋白的平滑肌细胞的形态及缝隙连接蛋白Cx43mRNA的改变；并应用RNA干扰技术，特异性Cx43 siRNA沉默外膜成纤维细胞的Cx43后，观察外膜层加入氧合血红蛋白后对侧未接触氧合血红蛋白平滑肌细胞的形态及缝隙连接蛋白的改变。为进一步研究血管外壁缝隙连接通道与SAH后的脑血管痉挛关系奠定基础。 方法： 1．原代培养兔基底动脉平滑肌细胞和兔胸主动脉外膜成纤维细胞并鉴定。分别取兔基底动脉中层、兔胸主动脉外层，应用组织贴块法培养平滑肌细胞和外膜成纤维细胞，用光学相差显微镜、免疫细胞化学染色鉴定。 2．以微孔多聚碳酸酯膜（PET膜）作为载体，模拟血管壁外弹力层，将血管壁外膜成纤维细胞（AFB）和平滑肌细胞（SMC）分别接种于PET膜的两侧，建立AFB-PET-SMC血管外壁重构模型。 3．在PET膜两侧分别接种AFB和SMC，在AFB侧加入10-6M浓度OxyHb的培养液，而另一侧的SMC培养液中无OxyHb，共培养24h后，利用分光光度仪分别检测PET膜AFB、SMC侧培养液中OxyHb的吸光度。 4．透射电镜观察共培养模型中外膜成纤维细胞和对侧平滑肌细胞形成的缝隙连接，划痕染料传输实验检测该缝隙连接通道功能，RT-PCR检测外膜成纤维细胞和平滑肌缝隙连接蛋白Cx43 mRNA的表达。 5．在PET膜一侧接种AFB并加入含10-6M浓度OxyHb的培养液，而另一侧