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本文开展了 Tn5转座子对广藿香青枯病菌插入诱变的研究,探讨了影响Tn5转座子对青枯病菌转化效率的因素;在此基础上,初步研究了突变株的生长特性及遗传稳定性。通过以上研究,建立了有效的广藿香青枯病菌Tn5转座插入突变体系,优化了转化的条件,为利用Tn5转座子诱变技术,构建广藿香青枯病菌突变体库、继而筛选有利用价值的突变株创造了条件。。1国内外研究评述查阅与本研究相关的国内外文献,概述了广藿香的研究进展;介绍了青枯病生物防治的研究进展;并总结了转座子插入诱变技术在植物病害防治等方面的应用。2影响Tn5转座子对广蕾香青枯病菌转化效率的因素以青枯菌菌株PRS-84、PRS-58、PRS-1和GIM1.70为研究对象,探索各菌株对卡那霉素的敏感性,确立合适的选择压力。利用电击法,开展了 Tn5转座子对广藿香青枯病菌的转化研究,考察了卡那霉素选择压力、细胞生长状态、感受态细胞密度以及电击时电场强度对转化效率的影响,并比较了不同青枯菌菌株转化效率的差异。结果表明:当卡那霉素浓度为10 μg/mL,青枯菌细胞生长受抑制,以该浓度作为选择压力进行电击后转化细胞的筛选。以稀释10倍OD6oo为0.250的菌液制成浓度为1 × 1010 CFU/mL的感受态细胞,在12.5kV/cm电场强度条件下接受电击转化,可获得较高的转化效率。不同青枯菌菌株的转化效率不同。Tn5转座子对3种广藿香青枯菌菌株的转化效率为0.48～2.73X l04CFU/μg DNA,而对番茄青枯菌菌株GIM1.70的转化效率高达 1389.65 × 104CFU/μgDNA。3广藿香青枯病菌突变株的生长特性分析以野生菌株PRS-84经转化获得的18个青枯菌突变株为供试菌株,对其菌落形态和生长趋势进行研究。结果表明:大部分突变株菌落形态与菌株PRS-84相同,仅少数突变株菌落在大小、颜色等方面稍有变化。分别测定突变株PRS-84-10-43、PRS-84-9-103与野生菌株PRS-84的生长趋势,结果表明它们的生长趋势基本一致。4广藿香青枯病菌突变株的遗传稳定性分析以野生菌株PRS-84经转化获得的18个青枯菌突变株为供试菌株,对其继代前后的抗性基因稳定性、菌落形态和生长曲线的变化进行考察。结果表明:经卡那霉素抗性基因的PCR验证,Tn5转座子插入序列在连续继代培养至25代的突变株体内稳定存在。大部分第25代突变株菌落形态与原代保持一致。分别测定第25代突变株PRS-84-10-43、PRS-84-9-103与原代突变株的生长趋势,结果表明继代前后突变株生长趋势基本一致,只是继代突变株各生长时期细菌量有所减少。以上结果表明,突变株基因组中的Tn5转座子遗传稳定,突变株继代前后菌落形态及生长特性变化不大。