辛伐他汀对结肠癌细胞HT29的促凋亡作用及可能机制

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目的:为进一步研究他汀类药物抗肿瘤作用,探讨他汀类药物内在的抗肿瘤机制,本实验通过细胞实验观察辛伐他汀对人结肠癌细胞HT29增殖、凋亡的影响,以及辛伐他汀对凋亡相关Bcl-2、Bax分别在基因水平和蛋白表达水平的调控,阐述辛伐他汀促进人结肠癌细胞HT29凋亡的可能机制,为他汀类药物在结肠癌的预防、治疗方面应用提供理论基础。  方法:常规培养人结肠癌HT29细胞,取其对数生长期的细胞进行试验。用不同浓度(终浓度为0、40、60、80、100μmol/L)辛伐他汀分别培养人结肠癌HT29细胞24、48、72h,观察细胞的增殖情况,噻唑蓝比色法(MTT)检测辛伐他汀作用下的细胞吸光度(OD)值,并计算其生长抑制率值;流式细胞仪检测不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、40、60、80、100μmol/L)对HT29细胞作用48h后细胞凋亡率;RF-PCR法观察不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、40、60、80μmol/L)作用48h后HT29细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRN人水平;Westernblotting法观察不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、40、60、80μmol/L)作用48h后HT29细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达情况。本实验以正常培养的HT29细胞(辛伐他汀终浓度为0μmol/L)为阴性对照,不同浓度辛伐他汀干预后的HT29细胞为实验组。  结果:噻唑蓝比色法(MTT)示辛伐他汀处理后的HT29细胞吸光度(OD)值较对照组降低(P<0.05),根据OD值计算所得抑制率随着作用浓度的增加、作用时间的延长而增高;流式细胞术检测发现辛伐他汀对HT29细胞具有促凋亡作用,随着辛伐他汀药物浓度增大其凋亡率逐渐增高(P<0.05);RT-PCR试验检测发现辛伐他汀作用HT29细胞后,随着辛伐他汀作用浓度的增高,Bcl-2 mRNA条带密度较阴性对照组依次降低、Bax mRNA条带密度较阴性对照组依次增高,各实验组与阴性对照组相比差别具有统计学意义,并呈现出浓度依赖性(P<0.05)。Western blotting实验发现辛伐他汀作用于HT29细胞后,随着辛伐他汀作用浓度的增高,Bcl-2的蛋白表达依次降低、而Bax的蛋白表达依次增高,各实验组与阴性对照组相比其差别具有统计学意义,并呈现浓度依赖性(P<0.05)。  结论:辛伐他汀可抑制体外培养的结肠癌细胞HT29的增殖,促进结肠癌细胞HT29的捌亡。辛伐他汀干预结肠癌HT29细胞后Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低;Bax mRNA和蛋白表达增高。在转录及翻译水平下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达可能是辛伐他汀促进结肠癌HT29细胞凋亡的机制之一。
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