人参果质量标准建立及指纹图谱研究

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人参果为五加科(Araliaceae)人参属(Panax)植物人参(Panax ginseng C.A.Meyer.)的干燥成熟果实。人参为多年生草本植物,主产于我国东北地区。目前国内外对人参地下部分的研究报道比较多,但对人参的地上部分研究报道相对来说比较少,特别是对人参果的研究更少,《中国药典》(2010年版一部)制定并收录了人参和人参叶的质量标准,但人参果未被收录。本文建立了人参果的质量标准,分别采用高效液相色谱法(HPLC)和红外光谱法(R)建立了人参果的指纹图谱,并应用表达序列标签简单重复序列技术(EST-SSR)对样品进行了标记,具体研究方法和结果如下:特性研究:主要通过文献检索及人参主产地的现场考察对人参果原植物的生长环境、人参果的采集加工和药材物理性状等进行了研究和规范。质量标准中的检查项目研究:建立人参果药材中水分、总灰分、重金属及有害元素、有机氯农药残留量的检测方法。规定人参果药材中水分不得过9%;总灰分不得过7%;铅不得过百万分之二;镉不得过千万分之二;砷不得过百万分之二;汞不得过千万分之二;铜不得过百万分之二十;人参果药材中有机氯农药残留量六六六(总BHC)不得过千万分之一;滴滴涕(总DDT)不得过百万分之一;五氯硝基苯(PCNB)不得过千万分之一。按上述方法对10批人参果药材进行了检测,结果均符合规定。定性鉴别研究:采用薄层层析鉴别法(TLC)建立了人参果中人参皂苷Re、Rg1和Rb1的鉴别方法,结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置处,显相同颜色的斑点。含量测定研究:采用紫外-可见分光光度法建立人参果中人参总皂苷的含量测定方法,10批样品中人参总皂苷的平均含量为14.77%,限定人参果按干燥品计算,含人参总皂苷以人参皂苷Re计,不得少于12%。采用高效液相色谱法(HPLC)建立人参果药材中人参皂苷Re和Rd的含量测定方法,10批样品中人参皂苷Re的平均含量为4.5%,人参皂苷Rd的平均含量为2.5%,限定人参果按干燥品计算,含人参皂苷Re不得少于3.5%,含人参皂苷Rd不得少于1.6%。HPLC指纹图谱研究:采用Agilent C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长203nm,柱温为35℃。结果确定了7个特征峰为共有峰,建立了特征峰的共有模式,并指认出全部共有峰成分,分别为人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rc、Rb2和Rd。利用中药色谱指纹图谱相似度分析软件,对10批样品进行HPLC指纹图谱分析,计算相似度,结果显示其中8批样品的相似度在0.97以上。红外指纹图谱研究:利用红外色谱法建立了人参果指纹图谱,分析发现10批不同产地的人参果提取物具有相似的化学成分,其中在2000cm-1左右处,均有明显的特征峰,可作为人参果进行定性鉴别依据。DNA指纹图谱研究:应用EST-SSR技术对10批人参样品进行标记,从26对EST引物中筛选出18对具有多态性的引物,在10个人参样品中在165个位点上扩增出条带,平均每对引物有7.94个扩增位点,其中多态性位点127个,多态率为76.97%。结果表明不同产地的人参存在遗传差异,相同产地的样品亲缘关系较近。综上,本课题首次对吉林省典型道地药材人参果进行了系统的质量标准研究以及指纹图谱的研究,系统地对人参果特性及质量的各项指标进行了测定和规范,为人参果的质量评价和控制提供了全面、科学、有效的方法和依据,进而为人参果相关产品的开发,提高人参药材附加值奠定了良好的基础。
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