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背景:2018年国家癌症统计中心公布的数据显示,乳腺癌已经超过肺癌成为女性发病率最高的癌症。在我国,每年乳腺癌新发病例大约为27万,专家指出早诊断早治疗,其治愈率可达90%以上,但由于诊断方法的滞后性,大多数患者诊断时已经错过最佳治疗期,以北京为例,首诊为Ⅰ期的患者比例只占32%。目前诊断乳腺癌主要依靠彩超、CT、细针穿刺等,但这些方法均具有不能早期筛查或有创等缺点,所以积极寻找新的早期诊断乳腺癌的标志物迫在眉睫。外泌体是直径在30-150nm之间的脂质双分子层结构的微小囊泡,大多数细胞在生理或病理状态下均分泌外泌体,外泌体广泛分布于人体体液中,包括外周血、唾液、尿液及羊水等。外泌体中包含丰富的蛋白质及遗传物质,可被运输到靶组织或靶器官行使其功能。CD82属于四跨膜蛋白超家族成员,是广谱的肿瘤转移抑制因子,其在正常组织中高表达而其表达降低或缺失,与肿瘤的发生与进展有关。目的:在健康人、乳腺良性疾病及乳腺癌患者中,分别比较血清及血浆外泌体中CD82表达的差异,以及组织切片中CD82表达量的差异,分析组织切片CD82表达量与外泌体中CD82含量之间的相关性,研究外泌体中CD82在乳腺癌早期诊断及预后评估中的应用价值。方法:研究对象240例,其中80例恶性乳腺癌、80例乳腺良性疾病及80例年龄匹配的健康人外周血作为对照,采用沉淀法快速提取血清和血浆中的外泌体;Nanosight方法检测外泌体浓度及粒径分布;ELISA及Western Blot检测外泌体标志性蛋白CD9及CD63的表达;ELISA检测外泌体CD82的表达;Western Blot检测外泌体中CD82及全血和血清中CD82的表达;Image Studio Ver 4.0软件计算蛋白条带的积分光密度值;免疫组化检测组织切片中CD82的表达量;Image pro-plus 6.0软件分析平均光密度量化组织中CD82表达量。结果:1.Nanosight方法检测外周血提取的外泌体,能够检测到直径为30-150nm的微囊泡,且ELISA及Western Blot均能够检测到外泌体标记蛋白CD9、CD63的表达。2.与良性乳腺疾病患者及健康体检者相比,乳腺癌患者血清及血浆外泌体中CD82表达量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.外泌体中CD82表达量明显高于外周全血及血清中其含量,差异有统计学意义(P<0.05)。4.与良性乳腺疾病组织及癌旁正常乳腺组织相比,乳腺癌组织CD82表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5.组织中CD82表达量与外泌体中CD82含量有显著相关性(r~2=0.7329,P=0.0019)。结论:1.采用SBI外泌体提取试剂盒能够从外周血中成功提取形态完整的外泌体。2.乳腺癌患者血清外泌体CD82含量明显高于健康人及乳腺良性疾病患者,并且随着乳腺癌分期的增高,其含量明显升高。3.外泌体中CD82含量明显高于血清及全血中CD82的含量,说明在乳腺癌患者血液中,CD82主要以外泌体形式存在。4.乳腺癌乳腺组织CD82表达量明显低于癌旁组织(作为对照)及乳腺良性组织,且组织中CD82表达量与外泌体中CD82含量呈显著负相关,表明随着乳腺癌恶性程度的进展,CD82表达从组织向血液中转移。