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环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的核酸扩增方法,仅需一个简单的恒温反应器就能够在等温条件下高效、快速对DNA进行扩增的分子生物学技术。本研究建立了禽呼肠病毒(Avian reovirus, ARV)的LAMP检测方法。基于禽呼肠病毒的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性。在荧光显色中分别应用SYBR Green I和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致。在对80份临床阳性样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份。同时,本研究还建立了传染性支气管炎病毒(IBV)的5a+5b基因序列8个区域的6条LAMP引物设计一套LAMP引物,建立了一种基于荧光显色的IBV逆转录环等温扩增检测方法。该方法能够在等温(63℃)条件下1h完成反应。该方法具有良好的敏感性和特异性,能够检出1个拷贝的阳性重组质粒,比普通PCR高100倍,而不能检出其他病毒。用HNB进行反应显色,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致。在对60份临床阳性样本检测中,使用LAMP和PCR检测的检出率分别为49份和42份。与PCR相比,LAMP快速,操作简便、成本低廉,只需要一个小时就能完成检测。另外,通过添加显色剂,在反应结束后即可直接观测判定结果。鉴于LAMP的诸多优点,本文建立的ARV-LAMP和IBV-LAMP方法适合在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。