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猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumonia ; APP)引起的一种猪呼吸道传染病,世界各国均有发生,尤以欧、美各国流行严重。各种年龄的猪均易感染,并常与巴氏杆菌等混合感染。临床症状以病猪呼吸困难为特征,病理变化主要是肺部不同程度的充血、出血和纤维素性肺炎,其发病率和死亡率常在20%以上,最急性型的死亡率可高达80%～100%,如果发展为慢性或潜伏于猪群内,可使猪生长缓慢,饲养成本增加,抵抗力下降。该病在我国的发生呈现逐年上升的趋势,给我国的养猪业造成了严重的经济损失。构成APP致病的毒力因素包括溶血毒素、荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、蛋白酶、渗透因子、尿素酶等。研究APP毒力因子的致病作用有利于毒力因子亚单位疫苗或基因工程疫苗的研究,同时对有效疫苗的选择和应用,预防和控制本病也具有重要意义。本研究主要分两个部分:第一部分:猪胸膜肺炎放线杆菌尿素酶的提取纯化及理化特性研究。胸膜肺炎放线杆菌在样品缓冲液中经超声波破碎后,4℃、10000r/min离心20min取上清得到粗提的尿素酶,再经过硫酸铵盐析和SephadexG-200凝胶过滤层析进行提纯,由SDS-PAGE电泳检测提取物的纯度并测定分子量,以及对尿素酶的理化特性,包括pH(6.0、6.5、7.0、7.5、7.7、8.0、8.5、9.0、9.5)和温度(25、30、35、40、45、50和55℃)对尿素酶活性的影响进行了研究。结果表明,APP尿素酶由三个亚单位组成,其分子量分别为11.0、25.0和60.0KD;该酶的最适pH为8.5,最适温度为45℃,在该条件下测得酶比活为96.253U/mg。第二部分:猪胸膜肺炎放线杆菌尿素酶对小鼠免疫原性研究。将制备的APP尿素酶分不同剂量(5、10、15、20、25和30μg/只)免疫小白鼠,然后进行同源保护性试验。结果尿素酶在25μg/只的免疫剂量下可对小白鼠产生较强的保护作用。用同血清型菌株对免疫后的小白鼠攻毒,病理学变化为对照组未经免疫直接攻毒的小白鼠全部死亡,肺脏严重出血,肝脏肿大出血,而免疫组除免疫5μg组的小白鼠全部死亡、肺脏出血严重,肝脏肿大出血外,其他组小鼠的死亡率呈下降趋势,与对照组相比,肺脏出血轻微;病理组织学变化为对照组肝细胞坏死崩解,肺泡内出血严重,肺间质增厚,间质内出血;免疫组也有类似病变,但程度不同,逐渐减轻。表明尿素酶在猪传染性胸膜肺炎的免疫保护过程中起一定的作用,该研究为APP亚单位疫苗的研制及应用提供了理论依据。