【摘 要】
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人体内的非酶糖基化是还原糖和氨基酸、蛋白质发生的复杂化学反应过程,非酶糖基化的终产物AGEs在人体内的增加和积累与众多疾病相关,如糖尿病、动脉粥样硬化等。果糖胺是非酶糖基化过程中生成的一个相对稳定的产物,它可以被果糖胺氧化酶氧化降解,因此果糖胺氧化酶是一种潜在的可以进行蛋白质脱糖并治疗相关疾病的工具,并且果糖胺氧化酶已经被用于人体血清果糖胺的检测,以反映人体2-3周内平均的血糖浓度。但果糖胺氧化酶
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人体内的非酶糖基化是还原糖和氨基酸、蛋白质发生的复杂化学反应过程,非酶糖基化的终产物AGEs在人体内的增加和积累与众多疾病相关,如糖尿病、动脉粥样硬化等。果糖胺是非酶糖基化过程中生成的一个相对稳定的产物,它可以被果糖胺氧化酶氧化降解,因此果糖胺氧化酶是一种潜在的可以进行蛋白质脱糖并治疗相关疾病的工具,并且果糖胺氧化酶已经被用于人体血清果糖胺的检测,以反映人体2-3周内平均的血糖浓度。但果糖胺氧化酶的制备方法复杂、生产成本高,严重限制了其进一步研究和应用,因此开发一种具有类果糖胺氧化酶催化活性的模拟酶用于果糖胺的降解具有重要意义。本文基于多肽和Cu2+构建了一种模拟酶,实现了对小分子果糖胺的降解,具体的研究包括以下内容:本文中,首先合成了一种小分子果糖胺-果糖基赖氨酸作为底物用于模拟酶研究,并使用核磁共振氢谱和高分辨质谱对其进行了表征。接着,利用多肽的固相合成法合成了一系列富含组氨酸的多肽,并使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行表征,确定了多肽的合成成功。将合成的多肽与Cu2+在中性缓冲液中自组装,形成了尺寸不同的片状形貌,肽链长度越长,片状结构的尺寸越大,并均具有β折叠二级结构,但单独的组氨酸和Cu2+自组装不具有二级结构。利用多肽和Cu2+自组装形成的复合物对果糖基赖氨酸进行降解,得出结论:多肽和Cu2+的自组装复合物的催化活性明显高于单独的Cu2+,推测可能是Cu2+和多肽配位后,对Cu2+的氧化还原电位进行了一定的调节,提高了其催化活性;在相同条件下,随着肽链的增长,模拟酶的催化活性也随之提高,而组氨酸和Cu2+的复合物基本没有催化活性,这可能与单独的组氨酸和Cu2+自组装不能形成合适的配位域有关;在相同条件下,模拟酶在37℃下的催化活性高于25℃;37℃条件下,当多肽H13浓度和Cu2+浓度为10:1时,模拟酶的催化活性达到最高,为17.83%。此外,本文还发现了:多肽H13和Zn2+、Ni2+、Fe3+在中性缓冲液中可以分别自组装形成片状结构、颗粒结构、球状结构,尺寸分别为100μm、100 nm、20μm,并且均具有β折叠的二级结构;37℃条件下,Zn2+、Ni2+、Fe3+与多肽H13形成的自组装复合物对底物果糖基赖氨酸基本没有催化活性,表明Cu2+的氧化还原电位是产生催化效果的重要因素。
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