论文部分内容阅读
2型糖尿病（T2DM）是当今危害人类健康的重大疾病之一,主要病理学表征为持续性高血糖。研究表明,除促进胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗等方式降低血糖外,延缓葡萄糖的吸收对降低餐后血糖也起到重要作用。大量研究证实,天然来源的黄酮类活性成分在改善胰岛素抵抗、促进胰岛素分泌等方面发挥一定作用,但针对黄酮类活性成分影响葡萄糖吸收方面的研究较少。根据目前研究现状,结合课题组研究方向,本论文对紫果西番莲叶中木犀草素、异荭草素、异牡荆素和牡荆素四种黄酮成分进行了含量测定,并探讨了这四种黄酮成分对葡萄糖吸收过程中α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用及葡萄糖转运载体表达的影响,结果如下:1、采用两种方法测定了紫果西番莲叶中木犀草素、异荭草素、异牡荆素、牡荆素的含量,检测出四种黄酮的保留时间分别为在15、12、20、17min;测得四种黄酮平均含量分别为为0.0154、0.2114、0.0621、0.1022mg/g。2、采用PNPG法发现,浓度范围在12.5-200μM的四种黄酮均对α-葡萄糖苷酶的活性具有一定抑制作用,其IC50值分别为19.39、102.03、163.34、209.57μM。采用Lineweaver-Burk双倒数法判断出四种黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制类型均为非竞争型可逆抑制类型,其抑制常数Ki分别为0.28、0.79、6.38、7.99mM。3、采用CCK-8法发现,经浓度范围在12.5μM-100μM的四种黄酮处理后的Caco-2细胞的存活率最大;采用葡萄糖氧化酶法发现50μM和100μM的四种黄酮均对Caco-2细胞中蔗糖酶和麦芽糖酶具有抑制作用。其中,木犀草素对细胞中蔗糖酶的抑制率最高。4、采用RT-qPCR法发现,木犀草素和异荭草素均能下调Caco-2细胞中蔗糖酶-异麦芽糖酶（S-I）、钠葡萄糖共转运体1（SGLT1）、葡萄糖协助扩散转运体2（GLUT2）的m RNA表达量;采用Western blotting法发现,木犀草素和异荭草素均能下调细胞中SGLT1、GLUT2的蛋白表达量。综上所述:木犀草素、异荭草素、异牡荆素、牡荆素四种黄酮均对α-葡萄糖苷酶具有一定抑制作用,其中木犀草素抑制作用最强。此外,木犀草素和异荭草素还可下调SGLT1和GLUT2的mRNA及蛋白表达水平,进而延缓葡萄糖的吸收。