聚合酶/核酸内切酶驱动的双模板多循环G-三联体机器应用于HIV检测

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本研究提出了一种简单的通过聚合酶/剪切酶高效驱动的双模板多循环扩增的DNA纳米机器。反应体系由两条单链模板(T1、T2)、两种酶(聚合酶、剪切酶构成),两条模板链被设计为类似的结构(X-X’-Y、Y-Y’-C):由3’端至5’端依次为引物识别区域、引物类似物生成区域、输出链区域,每两个区域之间有一个剪切位点。通过将T1的输出链设计为T2的引物以实现多循环扩增,T2的输出链区域设计为富含胞嘧啶的片段,使得扩增反应的终产物为富含鸟嘌呤片段(G3)。HIV-1DNA存在时,启动多循环扩增策略产生大量的G3,在加入硫黄素T(ThT)之后形成G-三联体/ThT复合物作为信号标签,大幅度增强了荧光信号。通过这一多循环扩增策略,实现了对50fM-2nM范围内HIV-1DNA的线性检测,检测限计算为30.95fM。并且建立的DNA纳米机器可在液相中一步完成,使得操作步骤简便,同时,提出的多循环扩增策略具有高效性,45分钟内即可完成扩增反应。通过对模板中目标物识别区域序列的更换,所构建的传感策略也能应用于其它目标物分析,具有检测痕量生物标志物的应用潜力。
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